农业生物技术学报

作者：龙翠琴, 武小椿, 岳亚辉, 张宏燕, 张立, 马海云, 邢小勇, 温峰琴, 包世俊

单位：甘肃农业大学 动物医学院 兰州 730070

关键词：兔出血症病毒,慢病毒载体,膜联蛋白A2 (ANXA2),兔肾细胞(RK13),

基金：甘肃省重点研发计划(20YF3NA015)

兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease, RHD)是兔(Oryctolagus cuniculus)的一种高致死性传染病,其由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)引起。膜联蛋白A2 (annexin A2, ANXA2)与多种病毒的感染过程密切相关。为探究兔ANXA2在RHDV侵染兔肾细胞(rabbit kidney cell, RK13)过程中的作用,本研究利用PCR扩增获得兔ANXA2基因片段,构建真核表达载体pCD513B-ANXA2,并将其与包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG转染至293T细胞,包装出含ANXA2基因的慢病毒颗粒并感染RK13,利用嘌呤霉素筛选稳定过表达ANXA2蛋白的细胞株RK13-513B-ANXA2;应用qPCR和Western blot检测ANXA2基因及其蛋白的表达情况;设计合成siRNA并转染RK13,进而分析基因表达情况;以RHDV感染RK13-513B-ANXA2细胞株2 h后,采用qPCR、免疫荧光(immunological fluorescence assay, IFA)和Western blot检测RHDV吸附量的相对变化。结果表明,利用慢病毒载体包装获得滴度较高的病毒颗粒,其滴度达5.0×107~1.0×108 TU/mL;RK13-513B-ANXA2细胞中ANXA2基因及其蛋白表达量均极显著增加(P<0.01);过表达ANXA2蛋白的RK13对RHDV的吸附作用明显增加(P<0.01),干扰ANXA2蛋白表达可显著下调RHDV对RK13的吸附作用(P<0.05)。本研究结果提示ANXA2可能参与RHDV对宿主细胞的感染,为进一步探究RHDV感染宿主细胞的机制提供了参考。

来源：2023年第2期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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