农业生物技术学报

作者：刘悦, 刘建青, 张春雨, 苏颖, 李小宇, 王永志

单位：1 吉林省农业科学院,公主岭 136100; 2 吉林农业大学 生命科学学院,长春 130118

关键词：珠葱,葱潜隐病毒,SYBR Green Ⅰ,实时荧光RT-PCR,

基金：吉林省农业科技创新工程(CXGC2021ZY011); 吉林省科技厅重点科技研发项目(20230202108NC); 国家重点研发计划子课题(2017YFD0201604)

葱潜隐病毒(Shallot latent virus, SLV)是危害珠葱(Allium cepa var. aggregatum)等葱属植物的主要病毒之一,在葱属植物种植区普遍存在。本研究根据GenBank中已登录的SLV 外壳蛋白(coat protein, CP)基因保守区,设计并合成1对特异性引物,通过对引物浓度和退火温度进行优化,建立了基于SYBR Green Ⅰ 的SLV实时荧光RT-PCR (reverse transcription PCR)检测方法。该方法标准曲线Ct值与模板浓度的对数呈良好的线性关系,扩增效率为94.529%,相关系数R2为0.999 6;与胡葱黄条病毒(Shallot yellow stripe virus, SYSV)、洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus, OYDV)和青葱X病毒(Shallot virus X, SVX)均无交叉反应;最低检出限为10-7倍稀释cDNA,为常规RT-PCR的1 000倍;组内和组间变异系数分别为0.02%~0.63%和0.03%~1.24%,表明该方法稳定性好。利用该方法对珠葱叶和鳞茎的SLV含量进行测定,并对50份疑似SLV感染的珠葱样品进行检测,结果表明,珠葱叶中SLV含量明显高于鳞茎,且SYBR Green Ⅰ 实时荧光RT-PCR检出46份阳性样品,检出率较常规RT-PCR高6%。本研究基于SYBR Green Ⅰ 建立的SLV实时荧光RT-PCR方法为珠葱SLV的快速检测提供技术支持。

来源：2023年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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