农业生物技术学报

作者：韦金平, 李云凤, 邱薇, 陈兴莆, 陈波宇, 陈新华, 覃盼

单位：1 福建农林大学 海洋学院,福州 350002; 2 福建省海洋生物技术重点实验室,福州 350002

关键词：变形假单胞菌,ExsA,原核表达,蛋白纯化,多克隆抗体,

基金：国家自然科学基金(U1905204); 财政部和农业农村部：国家现代农业产业技术体系专项(CARS-47)

Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system, T3SS)是革兰氏阴性菌中普遍存在的蛋白分泌机制,是细菌毒力因子产生致病效果的重要途径。阿糖胞苷(Ara-C)型 DNA 结合蛋白 ExsA 是 T3SS 的主要激活因子之一,能够调控 T3SS 相关蛋白的表达。本研究将变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida) PQLYC4菌株的 ExsA 基因克隆至原核表达载体 pET28a (+ ),将重组表达质粒pET-28a-ExsA 转化至大肠杆菌 (Escherichia coli) BL21 (DE3)感受态细胞进行诱导表达。结果显示,大肠杆菌表达的重组 ExsA 蛋白分子量略小于 30 kD,与预期分子量(29.7 kD)一致。将表达的重组 ExsA 蛋白进行纯化,免疫新西兰大白兔 (Oryctolagus cuniculus)制备抗 ExsA 蛋白的多克隆抗体,效价达 1∶256 000 以上 ;利用制备的抗体,采用 Western blot 和间接免疫荧光方法,检测变形假单胞菌菌体中的 ExsA 蛋白和鲤鱼(Cyprinus carpio)上皮细 胞(epithelioma papulosum cyprini, EPC)中过表达的 ExsA 蛋白,均可发生特异性反应。本研究为深入探讨 ExsA 蛋白结构及其在调控变形假单胞菌毒力因子 T3SS 系统中的功能提供了工具。

来源：2023年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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