农业生物技术学报

作者：张成远, 袁圆圆, 郭妍婷, 杨莉, 冉多良, 付强, 史慧君

单位：新疆农业大学 动物医学学院,乌鲁木齐 830052

关键词：囊泡运输蛋白(SEC22B),牛病毒性腹泻病毒(BVDV),CRISPR/Cas9基因编辑技术,基因敲低,复制,

牛病毒性腹泻病的感染情况日趋严重,给养殖业造成了严重的损失,目前我国缺乏有效的治疗手段,导致感染模式复杂化,其致病机制和病毒-宿主之间相互作用研究也尚不清楚。为了探究囊泡运输蛋白 (vesicle transport protein homolog, SEC22B)敲低对牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)复制的影响,根据 GenBank 数据库中 SEC22B 基因序列,使用 Benchling 平台设计向导 RNA (small guide RNA, sgRNA),克隆至 LentiCRISPR v2 载体后进行慢病毒包装,使用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术敲低胎牛肾细胞(madin-darby bovine kidney cells, MDBK)中的 SEC22B 基因表达,使用 Western blot 鉴 定 SEC22B 基因敲低(knockdown, KD)情况;BVDV 感染 SEC22B KD 细胞不同时间后,分别使用 qPCR 和免疫荧光染色检测 BVDV 5' UTR mRNA 水平变化和双链 RNA (double-stranded RNA, dsRNA)量,使用 Reed- Muench 法测定 BVDV 感染不同时间后子代病毒滴度变化。Western blot 检测发现,与对照 Scramble 细胞相比,SEC22B KD 细胞中 SEC22B 蛋白表达量显著降低 ;与 BVDV 感染 Scramble 细胞相比,BVDV 感染 SEC22B KD 细胞后 5' UTR mRNA 水平和 dsRNA 量均极显著降低(P<0.01),同时,子代病毒滴度极显著下降(P<0.01)。结果表明,敲低 SEC22B 基因后显著抑制 BVDV 复制,本研究为 BVDV 防控新方法的建立提供理论依据。

来源：2023年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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