农业生物技术学报

作者：唐宏, 王燕碧, 赵采芹, 王小亚, 石海英, 邢静如, 段志强

单位：1 贵州大学 高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室,贵阳 550025;2 贵州大学 动物科学 学院,贵阳 550025

关键词：鸡,转录因子 E2F1 (E2F1),TATA 结合蛋白(TBP),蛋白相互作用,亚细胞定位,

基金：国家自然科学基金(31960698; 31760732); 贵州省省级科学技术项目(黔科合基础[2020]1Y134 号); 贵州大学培育 项目(贵大培育[2021]14 号)

E2F 转录因子1(E2F transcription factor 1, E2F1)和 TATA 结合蛋白(TATA-binding protein, TBP) 共同参与了基因转录调节。为探究鸡(Gallus gallus) E2F1 和 TBP 蛋白的相互作用及其基因组织表达特性,本研究通过构建鸡 E2F1 和 TBP 基因的重组真核表达载体,共同转染人胚胎肾细胞(HEK-293T)后,利用间接免疫荧光和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)实验验证两者的相互作用;采用 qPCR 检测鸡 E2F1、TBP 基因在胚胎发育 14 d (E14 d)、出壳后1日龄(H1 d)、7 日龄(H7 d)和 14 日龄(H14 d)不同组织中的表达情况。结果表明,成功构建了鸡E2F1 和 TBP 基因的重组真核表达载体pCMV-HA-E2F1、 pCMV-Myc-TBP,其在细胞中得到正确表达且两者均主要定位在细胞核。Co-IP 结果表明, 鸡 E2F1 和 TBP 蛋白存在相互作用。组织表达特性分析表明, 鸡 E2F1 和 TBP 基因在4个阶段的不同组织中均有表达,且其表达水平存在显著差异(P<0.05);在 E14 d 时,E2F1 和 TBP 基因在肺脏中表达较高,在脑组织中的表达较低; H1 d 时,两者在肝脏中表达较高,在脑组织中的表达较低; H7 d 时,两者在脑组织中表达较高,在腿肌中的表达较低;H14 d 时,两者在肺脏、肝脏和心脏中表达较高,在胸肌、腿肌中的表达较低。鸡 E2F1 和 TBP 蛋白在细胞核中存在相互作用,E2F1 和 TBP 基因在4个阶段的多种组织中均有表达,但以肺脏和肝脏中的相对表达较高。本研究为 E2F1 和 TBP 蛋白互作调控鸡肺脏和肝脏组织发育的作用机理提供参考。

来源：2023年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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