农业生物技术学报

作者：刘斌, 王靖雷, 高丽青, 许瑞华, 张倩, 王萌, 王立斌, 余四九, 徐庚全, 潘阳阳

单位：甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070

关键词：牦牛,卵丘细胞,卵源因子(OSFs),溶血磷脂酸(LPA),

基金：基金项目: 国家自然科学基金(32160859); 甘肃省科技重大专项(21ZD10NA001); 甘肃省重点人才项目(2022-0623-RCC-0307)

一定浓度的溶血磷脂酸(lysobisphosphatidic acid, LPA)可以促进卵母细胞成熟,而卵丘细胞以及卵源因子(oocyte-secreted factors, OSFs)能够保障卵母细胞生长发育及功能的正常发挥。本研究旨在对卵丘细胞所分泌的卵源因子受到外源性溶血磷脂酸的调控后,其表达量的变化进行研究。以体外培养的牦牛(Bos grunniens)卵丘细胞为研究对象;添加外源性 LPA (0, 5, 15, 30 和 50 µmol/L)进行调控,采用 PCR、 qPCR、Western blot 及间接免疫荧光等方法,检测经 LPA 调控后卵丘细胞分泌的 OSFs 的表达变化。qPCR 结果显示：当添加的 LPA 浓度为 15 µmol/L 时,生长分化因子9(growth differentiation factor 9, GDF9)和成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors, FGF10) mRNA 的相对表达水平达到最高,浓度大于 15 µmol/L 时, GDF9 和 FGF10 mRNA的表达水平降低。LPA浓度为30µmol/L时,骨形态发生蛋白1(bone morphogenetic proteins 1, BMP1) 和 BMP15 mRNA的相对表达水平达到最高,浓度大于30 µmol/L 时, BMP15 mRNA 的表达水平降低, BMP1 mRNA 的相对表达水平变化不显著。Western blot 结果显示: 当LPA 浓度为 30 µmol/L 时, GDF9、BMP1、BMP15 蛋白的相对表达水平最高,浓度大于30 µmol/L 时, BMP1、BMP15 蛋白的表达水平降低,而 GDF9 蛋白的表达受到抑制。相比较其他 OSFs 蛋白对 LPA 的应答,在一定 LPA 浓度范围内,FGF10 蛋白相对表达水平与 LPA 的浓度之间呈现剂量依赖性。免疫荧光结果显示：0 µmol/L 处理组 OSFs 在卵丘细胞的荧光标记主要集中在细胞质和细胞核, 而 LPA 处理后的样本,OSFs 在卵丘细胞细胞质中的荧光标记明显增强。本研究证实,在牦牛卵丘细胞体外培养过程中,外源性 LPA 能够在基因与蛋白水平上调节 OSFs 在卵丘细胞中的表达,添加适当浓度的 LPA 能够增加卵丘细胞相关细胞因子的分泌,进而对卵母细胞的发育进行调节。本研究对于构建牦牛以及其他哺乳动物卵母细胞成熟的体外培养模式具有借鉴意义。

来源：2023年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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