农业生物技术学报

作者：陶世宇, 茹毅, 陈娇, 郝荣增, 李亚军, 卢炳州, 石正旺, 刘学荣, 郑海学, 魏彦明

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070;2 中国农业科学院 兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州 730046;3 中农 威特生物科技股份有限公司,兰州 730046

关键词：A 型塞内卡病毒(SVA),病毒结构蛋白 2 (VP2),重组串联表位蛋白,可溶性表达,免疫原性,

基金：甘肃省科技重大专项计划(21ZD3NA001); 中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费(1610312021013); 国家生猪产业技术体系(CARS-35)

A 型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)是一种新型的小 RNA 病毒, 严重危害我国养猪业的发展。 目前 尚无 有效 的 SVA 疫苗, 为探 究 SVA 新型 亚单 位疫 苗, 本研 究以 SVA 的病 毒结 构蛋 白 2 (viral structural protein 2, VP2)基因序列为基础,选取利用生物信息学方法预测的 B 细胞表位序列及已报道的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV) 3A 蛋白的 T 细胞表位基因,密码子优化后通过柔性连接肽进行串联连接,分别构建重组表达质粒 pET28a-rSVP2-B 和 pET28a-rSVP2-BT。将原核可溶性表达并纯化的重组串联表位蛋白 rSVP2-B 和 rSVP2-BT,经 SDS-PAGE 和 Western blot 鉴定后,免疫 BALB/c 小鼠(Mus musculus),评价其免疫原性。结果显示,重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3),经诱导表达后,目标蛋白均正确表达,SDS-PAGE 分析显示,其相对分子质量分别为34和 38 kD。Western blot 结果显示,rSVP2-B 和 rSVP2-BT 与 SVA 阳性血清均具有良好的反应原性。纯化后 rSVP2-B 和 rSVP2-BT 免疫小鼠产生的体液免疫水平无显著差异,均诱导产生了较强的特异性 IgG 抗体及 IgG1 抗体,且主要诱导偏向于 Th2 型的体液免疫应答。病毒中和实验结果显示, 2 种重组蛋白的中和抗体效价介于 1∶64~1∶128。 同时, rSVP2-B 和 rSVP2-BT 免疫小鼠也产生了较强的细胞免疫, 其中 rSVP2-BT 免疫组的脾淋巴细胞增殖水平、细胞因子白细胞介素-2 (interleukin-2, IL-2)和干扰素-γ (interferon-γ, IFN-γ)水平显著高于 rSVP2- B。以上结果表明,成功制备了具有良好免疫原性的重组串联多表位蛋白 rSVP2-B 和 rSVP2-BT,rSVP2- BT 的免疫原性优于 rSVP2-B。本研究为 SVA 多表位疫苗研制提供理论依据。

来源：2023年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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