农业生物技术学报

作者：占鹏飞, 窦金萍, 易咏竹, 刘兴健, 李轶女, 冯世民, 张志芳, 张金卫

单位：1 湖州市农业科技发展中心,湖州 313000;2 中国农业科学院 生物技术研究所,北京 100081;3 江苏科技大学 生物技术学院,镇江 212100

关键词：猪细小病毒(PPV),病毒空衣壳颗粒(VLP),杆状病毒表达系统,免疫效力,家蚕,

猪细小病毒(Porcine parvovirus, PPV)可引起猪(Sus scrofa domesticus)繁殖障碍,疫苗是预防猪细小病毒病、提高母猪抗病力和繁殖率的有效方法。为高效表达猪细小病毒结构蛋白 VP2 基因及制备猪细小病毒基因工程亚单位疫苗,根据家蚕密码子频率将 PPV-VP2 的基因序列进行优化合成,并将此目的基因片段连接到转移载体,通过共转染将目的基因重组到 orf1629 基因缺损的亲本病毒 BmBacmid 上,获得重组杆状病毒(Recombinant baculovirus) rBmNPV (PPV-VP2)。将重组杆状病毒 rBmNPV (PPV-VP2)感染家蚕 (Bombyx mori)蚕蛹, 并用表达的抗原制作疫苗, 采用豚鼠(Cavia porcellus)进行疫苗效力试验。经Western blot 和质谱分析、电镜观察表达产物。结果表明, 在蚕蛹中成功表达出可自组装成病毒空衣壳颗粒的目的蛋白;表达蛋白产物经血凝反应测定,每克蚕蛹表达的抗原效价相当于200剂以上商用疫苗;用表达产物制备成3种抗原剂量的疫苗免疫豚鼠,均产生抗体反应,其抗体能在体外中和 PPV 病毒。即使每克蚕蛹制备200头份疫苗免疫豚鼠, 其血凝抑制效价(hemagglutination inhibition, HI)也达到了 1∶128,中和抗体效价达到 1∶83,不低于市售商品苗免疫产生的效价。本研究为猪细小病毒亚单位空衣壳疫苗提供了低成本生产方法。

来源：2023年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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