农业生物技术学报

作者：曹璐, 王桃, 陈艳, 卢挺, 成晓丽, 姚丹, 赵兴绪, 张勇

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070;2 甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室,兰州 730070

关键词：槲皮素(QUE),小鼠乳腺上皮细胞(MMEC),PI3K-AKT/NF-κ,B 信号通路,

基金：甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室(20JR10RA563)；宁夏自治区重点研发项目(2019BBF02027)；甘肃省引导科技创新发展专项资金项目(GSCXZX-2019-1)

中药成分槲皮素(quercetin, QUE)是一种具有抗炎抗氧化作用的黄酮类化合物。本研究旨在探讨 QUE 对脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS) 诱导小鼠(Mus musculus)乳腺上皮细胞 (mouse mammary epithelial cells, MMECs)炎症损伤的保护机制,为临床治疗奶牛(Bos taurus)乳腺炎提供理论依据。首先通过 CCK-8 (Cell Counting Kit-8)成功筛选出体外实验中 LPS 最佳致炎浓度、药物 QUE 最适剂量和 LPS+ QUE 最适剂量 ;然后以 LPS 诱导 MMECs 出现炎症, 分为对照组、模型组(10 μg/mL LPS)、LPS+QUE 高剂量组(125 μg/mL)、LPS+QUE 中剂量组(62.5 μg/mL)和 LPS+QUE 低剂量组(31.25 μg/mL);最后通过形态学观察确定 MMECs 的生长状态 ,利用免疫荧光法鉴定 MMECs,利用 qRT-PCR 和 Western blot 方法检测炎症相关因子的表达变化。结果显示,该细胞中存在特异性蛋白 CK-18,证明为 MMECs;经 10 μg/mL LPS 诱导细胞炎症12h,炎症 相关因子TNFα 和 IL6 的基因表达量极显著高于空白对照组(P<0.01),证明 MMECs 致炎成功;QUE 作用于 MMECs 后 ,qRT-PCR 和 Western blot 检测显示炎症相关因子TNFα、IL6、 NF-κB、AKT 基因及蛋白表达下调且呈现剂量依赖性。因此,QUE 可能通过抑制 PI3K-AKT/NF-κB 信号通路改善 LPS 诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应,降低下游炎症因子 TNFα 和 IL6 的表达,从而发挥抗炎作用。本研究为临床治疗奶牛乳腺炎和开发潜在抗炎药物提供基础资料。

来源：2023年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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