农业生物技术学报

作者：章会斌, 刘阳光, 尚金男, 韩政, 周忍, 许黎明, 徐启隆, 郑先瑞, 殷宗俊, 张晓东

单位：安徽农业大学 动物科技学院/地方畜禽遗传资源保护与生物育种安徽省重点实验室,合肥 230036

关键词：miR-10b,同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN),颗粒细胞,猪,

基金：国家重点研发计划项目(2021YFD1301200); 国家自然科学基金(31972531); 安徽省高校协同创新项目(GXXT-2021-055)

miRNA (microRNA, miR)是可参与基因转录后调控的内源性非编码小 RNA,miR-10b 是猪(Sus scrofa) 卵巢闭锁过程中的一个关键调控因子,而其靶向基因同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog, PTEN)基因在细胞凋亡中起着重要作用。为探讨 miR-10b和PTEN基因对猪卵巢颗粒细 胞 (pig ovarian granulosa cells, pGCs) 凋亡的调控作用,本研究分别用miR-10b 的模拟物及抑制物转染 pGCs,构建过表达和抑制 miR-10b 的 pGCs 模型,采用流式细胞术检测过表达和抑制 miR-10b对pGCs凋亡的影响。结果显示,过表达 miR-10b 极显著增加了 pGCs 凋亡率(P<0.01),抑制 miR-10b 表达后 pGCs 凋亡率极显著降低(P<0.01)。基于生物信息学分析可知,miR-10b 能直接结合PTEN 3'UTR 区。进一步构建通过荧光素酶报告基因载体,发现相对于pmirGLO-PTEN-WT 与 mimic NC共转染组,pmirGLO- PTEN-WT与miR-10b mimic 共转染后的荧光活性更低(P<0.01),pmirGLO-PTEN-MUT 与 miR-10b mimic共转染,或与 mimic NC 共转染后,荧光活性无显著差异(P>0.05),pmiGLO 与 miR-10b mimic 共转染,或与 mimic NC 共转染的荧光也无显著差异(P>0.05),通过双荧光素酶报告基因系统再次证实了 miR-10b 能靶向结合 PTEN 3'UTR 区,抑制 PTEN 基因表达。利用 qPCR 及 Westren blot 检测 PTEN 基因及其蛋白的 表达水平,发现 miR-10b 可以抑制 PTEN 基因及其蛋白的表达水平。此外,在抑制 miR-10b 表达后,引入 siRNA 下调 PTEN 基因的表达,可以缓解 miR-10b 对 pGCs 凋亡的促进作用。本研究证实了 miR-10b 可以通过抑制靶基因 PTEN 的表达来调控 pGCs 凋亡,为深入了解 pGCs 的凋亡机制和研究卵泡发育提供了数据支持。

来源：2023年第7期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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