农业生物技术学报

作者：陈曦, 杨金先, 陈华, 葛均青

单位：福建省农业科学院生物技术研究所,福州 350003

关键词：鳗鲡疱疹病毒(AngHV),ORF36,原核表达,多克隆抗体,中和作用,定位,

基金：福建省公益类科研院所基本科研专项(2021R1027007); 福建省科技厅星火项目(2021S0001); 福建省农业科学院 “5511”协同创新工程建设项目(XTCXGC2021013)

鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus, AngHV)是鳗鲡(Anguilla)的一种重要病毒性病原,可引起养殖鳗鲡暴发“脱黏败血综合征”,给养殖者造成巨大的经济损失。开展 AngHV的免疫原性蛋白研究对于开发AngHV的免疫学诊断技术及亚单位疫苗具有重要意义。为了获得鳗鲡疱疹病毒的免疫原性蛋白, 本研究通过质谱分析 AngHV 病毒粒子结构蛋白,筛选到 ORF36,对其氨基酸序列进行生物信息学分析, 克隆至原核表达载体进行诱导表达 ;用纯化的重组表达蛋白制备兔抗多克隆抗体,评价该抗体检测 AngHV的特异性、灵敏性以及病毒中和效果,并对 ORF36 进行病毒粒子结构定位。结果显示,通过质谱鉴定出病毒的主要免疫原性蛋白 ORF36;序列分析显示,ORF36 无跨膜结构域,不含有信号肽,具有 13 个B 细胞抗原表位,免疫原性良好 ;克隆 ORF36 至原核表达载体 pET-30a,实现了其在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中的高效表达,重组表达蛋白大小约为 40 kD;ELISA 检测显示,制备的兔抗 ORF36 多克隆抗体效价为 1∶8 000;Western blot 结果显示,该抗体能特异性识别感染 AngHV的鳗鲡卵巢细胞系(eel ovary cell line, EO)及鳗鲡组织,最低可检测的内脏组织的病毒量为 1 000 PFU;抗体中和试验表明,制备的兔抗 ORF36 多克隆抗体具有中和作用,能显著降低 AngHV的病毒滴度 ;ORF36的病毒粒子定位分析表明,ORF36 是病毒粒子的结构蛋白且定位于核衣壳上。 本研究鉴定出病毒的主要免疫原性蛋白ORF36,制备了具有病毒中和作用的ORF36 多克隆抗体,明确了 ORF36 为 AngHV 核衣壳结构蛋白,为阐明 ORF36 在AngHV 侵染过程中的作用及开发病毒亚单位疫苗提供了参考。

来源：2023年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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