农业生物技术学报

作者：雷明荃, 黄进强, 李永娟, 吴深基, 赵璐, 潘玉财, 孙同振

单位：1 甘肃农业大学 动物科学技术学院,兰州 730070;2 甘肃农业大学 理学院,兰州 730070

关键词：虹鳟,三基序蛋白 25 (TRIM25),传染性造血器官坏死病毒(IHNV),基因克隆,表达分析,

基金：甘肃省现代丝路寒旱农业科技支撑计划(GSLK-2021-16); 甘肃农业大学“伏羲青年英才培育计划”项目(Gaufx-02Y08)

三基序蛋白 25 (tripartite motif containing 25, TRIM25)是宿主抗病毒免疫应答中发挥重要作用的TRIM 蛋白家族成员之一。为了解虹鳟(Oncorhynchus mykiss) TRIM25 基因分子特征及其在感染传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus, IHNV)过程中的表达变化,本研究采用cDNA 末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术获得虹鳟 TRIM25 基因cDNA 全长序列(GenBank No. OL692831),并对其进行生物信息学分析,同时利用qPCR 技术检测 TRIM25 基因在健康虹鳟不同组织及感染 IHNV 后不同时间点(0, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120 和144 h)肠道、肝脏、脾脏、皮肤、头肾和鳃中的表达变化。结果显示,虹鳟 TRIM25 基因cDNA 全长序列 4 745 bp,其开放阅读框 2 028 bp,编码 675 个氨基酸。生物信息学分析表明,TRIM25 蛋白分子量为 76.04 kD,理论等电点为 8.79,不稳定系数为 49.2,平均亲水系数为-0.591,属于不稳定亲水蛋白。对 TRIM25 蛋白结构域分析发现,该蛋白包含 RING、B-boxes、 B-Box C-terminal domain 和PRY-SPRY 结构域。 同源比对及系统进化树分析表明,虹鳟与大马哈鱼 (Oncorhynchus keta)同源性最高(94.96%)且亲缘关系最近,与哺乳动物和两栖动物同源性较低。qPCR 检测发现,TRIM25 基因在健康虹鳟各组织中均有表达,其在肝脏中的表达量最高,头肾和脑中的表达量次之,皮肤中的表达量最低。感染 IHNV 后,TRIM25 基因在肝脏、头肾、脾脏、肠道和皮肤的表达量均在48 h 达到峰值,鳃在96 h 表达量达到峰值,各组织在峰值时的表达量与对照组相比差异极显著(P<0.01),其中以头肾和脾脏表达变化较显著,分别为对照组的5.72 和4.33 倍。上述结果表明,TRIM25 基因可能在虹鳟抗 IHNV 感染的免疫应答中发挥着重要作用。本研究为深入研究 TRIM25 基因在鱼类抗病毒免疫调控中的作用提供了基础资料。

来源：2023年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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