农业生物技术学报

作者：刘柯江, 李沛轩, 张睿, 王亭玮, 索南吉, 王雯慧

单位：甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070

关键词：双峰驼,糖蛋白 2 (GP2),原核表达,抗体制备,回肠,

基金：国家自然科学基金(31960693; 31760723)

糖蛋白 2 (glycoprotein 2, GP2)是由粘液腺和分泌细胞产生的一种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白 (glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins, GPI-APs),能够摄取肠腔内的病原菌,对维持机体的稳态具有重要意义。为获得抗双峰驼(Camelus bactrianus) GP2的抗体并研究 GP2 在双峰驼回肠中的表达情况,将双峰驼 GP2 基因(GenBank No. XM_045521202.1)连接至 pET-28a,构建重组质粒 pET-28a-GP2,再转入大肠杆菌(Escherichia coli) 感受态细胞 BL21(DE3) 中诱导表达,优化诱导条件后,通过SDS-PAGE 和Western blot 验证。用已获得目的蛋白制备兔抗双峰驼 GP2 多克隆抗体,并通过ELISA 和Western blot 检测效价及其特异性,最后采用免疫组织化学染色方法了解其在回肠中的表达情况。结果表明,GP2 蛋白的大小约为 65 kD,最佳诱导条件为 0.5 mmol/L 异丙基- β -D- 硫代半乳糖苷 (isopropyl-beta-D- thiogalactopyranoside, IPTG) 6 h,主要以包涵体的形式表达。经 ELISA 和Western blot 检测,抗体效价为1∶2.56×105,能特异性识别重组蛋白 GP2。免疫组织化学染色结果显示,GP2 主要在回肠的滤泡相关上皮表达,并且在微皱褶细胞的细胞膜上表达。本研究为 GP2的后续研究提供了参考,同时丰富了黏膜免疫的相关理论,解决了目前市场上没有商品化抗体的问题,为开发新型药物提供抗体支撑。

来源：2023年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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