农业生物技术学报

作者：张配颖, 宋鹏琰, 周荣艳, 付强, 周营, 丁虹

单位：河北农业大学 动物科技学院,保定 071001

关键词：DNA 结合抑制因子 1 (ID1),绵羊,颗粒细胞,增殖,凋亡,

基金：河北省自然科学基金(C2019204039); 河北农业大学精准畜牧学科群(1090064)

DNA 结合抑制因子 1 (inhibitor of DNA binding 1, ID1)在机体内广泛存在,影响细胞的增殖和凋亡。为揭示转录因子 ID1 在绵羊(Ovis aries)卵泡颗粒细胞增殖和凋亡过程中的作用,本研究构建了真核过表达载体 pcDNA3.1-ID1,设计合成了 ID1 RNA 干扰片段(siID1),将分离培养的绵羊卵泡颗粒细胞进行卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)处理,24 h 后利用qRT-PCR 检测 ID1 基因表达。结果显示, FSH 处理细胞后,ID1 基因表达量极显著降低(P<0.01)。进一步将 pcDNA3.1、pcDNA3.1-ID1、siID1 和siNC (siID1的阴性对照)转染颗粒细胞,采用CCK-8 法检测转染 5 d 内颗粒细胞的增殖,转染 48 h 后,采用JC-1 试剂盒检测颗粒细胞的凋亡,并利用qRT-PCR 检测增殖与凋亡相关基因的表达变化。结果显示,过表达 ID1的颗粒细胞存活率降低,JC-1 绿色荧光增强,增殖相关基因周期蛋白依赖性激酶 2 (cyclin dependent kinase 2, CDK2)、周期蛋白依赖性激酶 4 (cyclin dependent kinase 4, CDK4) 和细胞周期素 D2 (cyclin D2 , CCND2)的表达量显著降低(P<0.05),凋亡相关基因B 淋巴细胞瘤-2 基因(B-cell lymphoma-2, Bcl2)的表达量显著降低(P<0.05),Bcl2 相关 X 蛋白(Bcl2-associated X protein, Bax)基因表达量显著升高 (P<0.05),胱天蛋白酶 3 (caspase-3, Casp3)基因表达量极显著升高(P<0.01);抑制 ID1 表达颗粒细胞存活率升高,JC-1 绿色荧光减弱,增殖相关基因CDK2 和CCND2的表达量极显著升高(P<0.01),CDK4 基因表达量显著升高(P<0.05),凋亡相关基因Bcl2的表达量极显著升高(P<0.01),Bax 基因表达量显著降低(P<0.05)。 综上所述,转录因子 ID1 抑制了绵羊颗粒细胞的增殖且促进了颗粒细胞的凋亡,本研究结果为探讨 ID1 在卵泡颗粒细胞中的生物学功能及揭示其在卵泡发育中的作用提供了基础资料。

来源：2023年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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