农业生物技术学报

作者：杨锐, 茹毅, 郝荣增, 李亚军, 杨洋, 任蕊芳, 卢炳州, 毛玉涵, 张越, 郑海学, 张勇, 赵兴绪

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070; 2 中国农业科学院 兰州兽医研究所/兰州大学 动物医学与生物安全学院/动物疫病防控全国重点实验室,兰州 730046; 3 中农威特生物科技股份有限公司,兰州 730046

关键词：A型塞内卡病毒(SVA),病毒结构蛋白2 (VP2),原核表达,分子伴侣,可溶性表达,免疫原性,

基金：甘肃省科技重大专项计划(21ZD3NA001); 甘肃省自然科学基金(22JR5RA030); 甘肃省青年科技基金计划项目(20JR10RA474); “十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目(2022SDZG02); 中国农业科学院兰州兽医研究所所级基本科研业务费(1610312021013; 1610312022009)

A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)是一种新近流行的小RNA病毒,严重危害着全球养猪业的健康发展。SVA病毒结构蛋白2 (viral structural protein 2, VP2)在诱导机体免疫应答中发挥了重要的作用。为制备可溶性的SVA结构蛋白VP2,并系统分析其免疫原性,本研究首先以SVA/CH-FJ-2017毒株基因序列为基础,构建SVA-VP2蛋白重组表达质粒pET28a-SVA-VP2。然后将pET28a-SVA-VP2重组质粒与分子伴侣pTf16质粒共同转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)感受态细胞,利用分子伴侣TF (trigger factor)在原核表达系统中促进蛋白可溶性表达的特性,诱导表达可溶性的SVA-VP2重组蛋白。纯化目标蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定后,免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),通过间接ELISA检测血清抗体水平,病毒中和试验测定中和抗体滴度,流式细胞术检测分析脾脏CD4+、CD8+ T淋巴细胞亚群,以及脾脏淋巴细胞增殖及细胞因子产生的情况。结果表明,利用分子伴侣TF16成功制备了可溶性的VP2重组蛋白,并且VP2重组蛋白能够与SVA阳性血清发生特异性免疫反应,免疫组小鼠的血清抗体效价可达1:32 000,中和抗体水平可达1:128,免疫组小鼠脾脏CD4+和CD8+ T淋巴细胞百分比含量极显著高于对照组(P<0.001),干扰素-γ (interferon-γ, IFN-γ)、白细胞介素-2 (interleukin-2, IL-2)、IL-4和IL-10等细胞因子表达水平极显著高于对照组(P<0.001)。本研究成功利用分子伴侣TF共表达制备了可溶性的重组VP2蛋白,且重组VP2蛋白在体内、外试验中均具有良好的免疫原性,能够引发机体产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答,为SVA亚单位疫苗和诊断制剂的研制提供了实验材料和理论依据。

来源：2023年第9期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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