农业生物技术学报

作者：张潇文, 杨晓莉, 毕冬琳, 杨东亮, 刘方程, 令世鑫, 柏家林, 李琼毅, 张德荣

单位：1 西北民族大学 生物医学研究中心/甘肃省动物细胞技术创新中心,兰州 730030; 2 西北民族大学 生命科学与工程学院,兰州 730030

关键词：非洲绿猴肾脏上皮细胞(Vero),细胞悬浮培养,蛋白质组学,细胞粘附,多配体蛋白聚糖-4 (SDC4),

基金：国家自然科学基金(31860696); 兰州市人才创业创新项目(2020-RC85); 甘肃省自然基金(21JR11RA018)

细胞-细胞及细胞-细胞外基质的粘附取决于细胞特有的粘附蛋白及其相关调节信号。非洲绿猴肾脏上皮细胞(African green monkey kidney epithelial cells, Vero)是流感病毒(Influenza virus)、新型冠状病毒(Novel coronavirus)等多种病毒繁殖、纯化和疫苗生产的优良细胞株,为进一步探寻与Vero细胞粘附相关的蛋白,继而有效提升大规模高密度悬浮培养,本研究利用基因修饰及无血清培养基细胞技术成功构建悬浮型Vero细胞,并通过串联质谱标签(tandem mass tag, TMT)定量蛋白质组学技术对贴壁培养Vero细胞(adherent culture Vero, Adh_Vero)和悬浮培养Vero细胞(suspension culture Vero, Sus_Vero)中与细胞粘附性能相关的差异表达蛋白进行分析,以期为与悬浮培养Vero细胞粘附相关的候选靶基因筛选提供依据。结果表明,与Adh_Vero细胞相比,Sus_Vero细胞中表达差异显著的蛋白质有190个,其中上调表达蛋白116个,下调表达蛋白74个。通过GO功能注释和KEGG通路富集筛选获得与粘附相关的差异表达蛋白6个,其中5个上调表达蛋白分别是多配体蛋白聚糖-4 (syndecan 4, SDC4)、肌动蛋白调节器(enabled homolog, ENAH)、肌球蛋白轻链12β (myosin light chain 12β, MYL12β)、肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinas, MYLK)和封闭蛋白(occludin, OCLN),1种下调表达蛋白为整合素β2蛋白(integrin β2, ITGβ2)。qPCR检测表明,Sus_Vero中SDC4、OCLN、MYL12β、MYLK以及ENAH的mRNA水平极显著下调(P<0.01),ITGβ2的mRNA水平极显著上调(P<0.01)。Western blot检测表明,Sus_Vero中SDC4蛋白表达量也比贴壁培养细胞中显著减少,与定量蛋白质组学蛋白质表达趋势一致。本研究结果初步揭示了Vero细胞的粘附机制,为进一步运用基因工程技术构建Sus_Vero提供了有效候选靶蛋白。

来源：2023年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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