农业生物技术学报

作者：陈梦陶, 朱龙佼, 刘海燕, 许文涛

单位：1 华北理工大学 公共卫生学院,唐山 063210; 2 中国农业大学 营养与健康系/食品精准营养与质量控制教育部重点实验室,北京 100083; 3 中国农业大学 食品科学与营养工程学院 转基因生物安全性评价(食品安全)重点实验室/食品质量与安全北京实验室,北京 100083; 4 天津体育学院 运动营养与健康组学研究中心,天津 301617

关键词：半巢式PCR,SYBR GreenⅠ染料,弓形虫,实时荧光检测,

基金：国家重点研发计划(2022YFF0607900); 北京市科技计划(Z221100007122004); 北京市景观休闲农业创新团队项目(BAIC09-2023); 河北省重点研发计划(21372801D); 青年人才托举工程项目(BYESS2022133)

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种全世界分布的人畜共患寄生虫,在猪(Sus scrofa)和小型家畜中的慢性感染率较高,能够经食源性传播感染人类,对免疫功能较弱的个体会造成极大的危害。本研究根据GenBank公布的弓形虫529 bp基因序列(DQ779191.1)设计了一组特异性引物,基于SYBR GreenⅠ染料建立了半巢式PCR实时荧光法对弓形虫进行检测。第一轮扩增利用外引物扩增弓形虫529 bp重复序列,第二轮则结合SYBR GreenⅠ染料利用内引物对529 bp基因片段进行实时荧光扩增,其最终产物片段长度为260 bp。在优化后的最佳反应条件下,该方法的检测限为18.4 fg/μL,灵敏度较高;与细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)、猪肉绦虫(Taenia solium)基因组均无交叉反应,特异性较强。因此,本研究成功建立了灵敏度高、特异性强的半巢式PCR实时荧光检测方法,为监测家畜及肉类食品中弓形虫感染情况提供了有效的技术手段。

来源：2023年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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