农业生物技术学报

作者：胡衍铵, 曾丽华, 李竹, 李凤瑶, 黄玉林, 李瑞民, 黄桂艳

单位：1 赣南师范大学 生命科学学院,赣州 341000; 2 国家脐橙工程技术研究中心,赣州 341000

关键词：黄龙病,Sec依赖型效应蛋白(SDE),酵母双杂交文库,蛋白互作,感病基因,

基金：江西省“双千计划”创新领军人才短期项目(jxsq2020102129); 江西省自然科学基金(20202BABL215006); 国家级大学生创新创业训练计划(202110418008); 校级大学生创新创业训练计划(CX220066)

黄龙病是柑橘产业中最具毁灭性的病害,主要由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus, CLas)引发,其致病机理尚不清楚。Sec依赖型效应蛋白(sec-dependent effectors, SDE34)(CLIBASIA_04055)是黄龙病菌的核心SDE效应蛋白之一,为了筛选黄龙病菌SDE34在柑橘中的寄主靶标,本研究以感染黄龙病的纽荷尔脐橙(Citrus sinensis)叶片为材料构建酵母双杂交(yeast two hybrid, Y2H) cDNA文库,通过Y2H技术筛选与SDE34互作的柑橘蛋白,并利用双分子荧光互补技术(bimolecular fluorescence complementation, BiFC)对其互作进行验证。结果表明,本研究构建的酵母双杂交cDNA文库滴度为2.3×108 CFU/mL,插入片段长度为300~2 000 bp。通过Y2H筛选到3个柑橘蛋白与SDE34互作,其中重金属相关的异戊二烯化植物蛋白(heavy metal-associated isoprenylated plant protein, HIPP7)的筛选频率高达83.33%,BiFC结果表明,HIPP7与SDE34在植物细胞中互作。亚细胞定位结果表明,HIPP7在植物细胞质和细胞核中均有分布。实时荧光定量PCR分析发现,感染黄龙病后,HIPP7基因极其显著下调表达(P<0.001)。HIPP7同源基因在多种植物-病原菌互作体系中作为感病基因发挥功能,提示SDE34可能通过靶向柑橘感病基因HIPP7促进黄龙病菌侵染。本研究为解析黄龙病的致病机理以及柑橘抗病育种提供理论依据。

来源：2023年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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