农业生物技术学报

作者：吴昊, 刘星雨, 甘诗琪, 周小杰, 周莹珊, 宋厚辉, 周兴东, 王晓杜

单位：浙江农林大学 动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室,杭州 311300

关键词：猪圆环病毒(PCV),基因工程抗体,猪源化改造,真核表达,

基金：国家自然科学基金(31972656); 浙江省农业重大技术协同推广项目(2021XTTGXM02); 浙江省“三农六方”项目(2021SNLF023); 杭州市农业与社会发展科研项目(20201203B61); 金华市农业重点研发项目(2022-2-022)

猪圆环病毒2d型(Porcine circovirus type 2d, PCV2d)是猪圆环病毒的一个主流亚型,是引起断奶仔猪(Sus scrofa)多系统衰竭综合征等猪免疫抑制相关疾病的重要病原,严重危害着我国养猪业的健康发展。目前报道的PCV2d中和表位均位于衣壳蛋白(capsid protein, Cap)上,Cap是产生中和抗体的关键蛋白,其中和抗体能够与病毒结合,从而阻止PCV2d的感染。本研究首先通过原核表达、纯化获得PCV2d Cap重组蛋白,并免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),筛选得到了2株鼠源抗PCV2d Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B3和1B4,其中1B3具有中和活性且不与其他病毒发生交叉反应。将1B3抗体可变区基因与猪源恒定区基因嵌合后克隆至真核表达载体中,利用中国仓鼠(Cricetulus griseus)卵巢CHO-S细胞制备1株PCV2d Cap蛋白重组猪源化嵌合抗体r1B3swine稳定表达细胞系。抗体功能验证和Western blot结果显示,r1B3swine与PCV2d病毒结合反应良好,并且不与抗鼠二抗发生交叉反应。综上所述,本研究构建的猪源化抗PCV2d Cap蛋白的单克隆抗体r1B3swine的真核表达体系,为研究PCV2d Cap蛋白的结构、功能及为PCV2研发新的治疗和诊断制剂提供物质基础。

来源：2023年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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