农业生物技术学报

作者：宋代丽, 杨富升, 陈钰乔, 孙凡媛, 陈汭, 曹三杰, 黄小波

单位：1 四川农业大学 动物医学院 猪病研究中心,温江 611130;2 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站,温江 611130;3 四川农业大学 国家级动物类实验教学示范中心,温江 611130

关键词：猪δ,冠状病毒(PDCoV),M蛋白,截短表达,间接ELISA,应用,

基金：四川省科技创新苗子工程资助项目(2020045); 云南省重大科技专项计划(202102AE090039); 四川农业大学创新训练计划项目(201810626008)

猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)是一种新出现的猪(Sus scrofa)肠道致病性冠状病毒,可导致哺乳仔猪严重脱水、呕吐及水样腹泻,在全球范围内广泛分布。为建立一种快速检测PDCoV抗体的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学方法分析M蛋白的基因序列特性,设计并扩增PDCoV的M基因序列76~651 bp区域,与表达载体pET-32a构建重组质粒,转化大肠杆菌(Escherichia coil) Transetta (DE3)进行诱导表达,获得截短表达的M蛋白(约35 kD);Western blot实验证明其与猪PDCoV阳性血清有良好的反应原性。基于纯化的重组M截短蛋白构建间接ELISA方法,确定阴阳性判定临界值为0.271。建立的ELISA方法与猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV-2)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)、猪口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(Swine transmissible gastroenteritis virus, TGEV)等阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数均小于10%;与基于PDCoV S1-CTD蛋白的间接ELISA方法的总符合率高达96%,表明该方法具备良好的特异性、敏感性、重复性及较高的符合率。用建立的ELISA方法检测2012~2018年四川部分地区收集的507份猪血清,结果显示总阳性率为49.11%,初步证明该病已在四川感染严重。本研究基于M截短蛋白构建的间接ELISA方法,为PDCoV疫病诊断和血清流行病学调查提供技术支持,对于PDCoV防控具有一定的意义。

来源：2022年第2期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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