农业生物技术学报

作者：傅秋玲, 张蕊, 傅光华, 万春和, 程龙飞, 施少华, 陈红梅, 刘荣昌, 黄瑜

单位：1 福建省农业科学院 畜牧兽医研究所,福州 350013;2 福建省禽病防治重点实验室,福州 350013

关键词：鸭星状病毒3型(DAstV-3),RNA依赖性的核糖核酸聚合酶(RDRP),SYBR GreenⅠ,实时荧光定量PCR,

基金：福建省科研院所公益性行业专项; 福建省农业科学院青年英才项目(YC2019010); 福建省农业科学院国家基金培育项目(GJPY2019001); 国家现代农业(水禽)产业技术体系(CARS-42-18)项目; 江西省“双千计划”人才项目(jxsq2018102118); 福建省农业科学院禽病防控重点创新团队(CXTD2021005-1)

鸭星状病毒3型(Duck astrovirus-3, DAstV-3)是近年来危害我国养鸭业的新发病原。本研究根据前期从樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domestica)胚中分离鉴定的DAstV-3分离株及已报道毒株的RNA依赖性的核糖核酸聚合酶基因(RNA-dependent RNA polymerase, RDRP)特征设计特异性引物,建立检测DAstV-3的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果表明,该方法的标准曲线循环域值(Ct)与标准品模板浓度在1.15×101~1.15×107拷贝/μL间线性关系良好,相关系数R2和扩增效率分别为0.999和2.08;该方法特异性强,仅可检出DAstV-3,而对鸭常见疫病病原(DAstV-1, DAstV-2, 禽流感病毒H9 (H9 subtype Avian influenza virus), 禽坦布苏病毒(Avian tambusu virus), 鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus), 番鸭细小病毒(Muscovy parvovirus))检测均为阴性;灵敏度高,其最低检测下限为23拷贝;并且重复性好,批内和批间重复试验变异系数分别为0.14%~0.65%和0.53%~0.94%,均低于1%。利用该方法对2018年6月至2021年3月的209份疑似DAstV-3感染病例样品进行检测,DAstV-3的阳性检出率为56.5% (118/209)。综上结果表明,本研究所建立的方法特异性强、灵敏度高、稳定性好,为DAstV-3感染的快速诊断和流行病学监测提供了有力的技术支持。

来源：2022年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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