农业生物技术学报

作者：沈龙仙, 王丽婷, 汪涵, 杨松柏, 李向臣, 赵阿勇, 周晓龙

单位：浙江农林大学 动物科技学院/动物医学院,临安 311300

关键词：烟酰胺单核苷酸(NMN),C2C12细胞,成肌分化,肌肉特异性基因,

基金：国家自然科学基金(31872397); 浙江省自然科学基金(LY19C170003)

烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide, NMN)具备多种生物学功能,对心脑疾病、老年退行性疾病、神经退行性疾病、抗衰老等具有治疗作用。经NMN处理后的骨骼肌对衰老相关的转录变化有显著的预防作用,但NMN对骨骼肌增殖分化有何作用尚不明确。为深入了解NMN对细胞成肌分化的影响、丰富肌肉生长发育的机制,本研究以小鼠(Mus musculus)成肌细胞(mouse myoblasts) C2C12为模型,将不同浓度的NMN (0, 0.1, 1和2 μg/mL)应用于2%马血清(horse serum, HS)诱导分化的C2C12。采用CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法检测NMN处理后C2C12细胞的活力;通过2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'-dichlorodi-hydrofluorescein diacetate, DCFH-DA)和四氯四乙基苯并咪唑碳菁碘(5,5',6,6'-tetrechloro-1,1',3,3'-tetraethyl benzimidazol carbocyanine iodide, JC-1)两种荧光探针,分别对细胞进行染色,检测NMN对C2C12细胞线粒体膜电位和活性氧(reactive oxygen species, ROS)的影响;利用Western blot及免疫荧光技术检测肌细胞分化标记因子肌生成素(myogenin, MyoG)、肌分化因子1 (myogenic differentiation 1, MyoD1)表达和肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MYH)的蛋白表达水平。结果显示,0、0.1、1和2 μg/mL的NMN对C2C12细胞没有毒性作用,并且一定浓度的NMN在一定时间内可以促进细胞活力,提高线粒体膜电位,上调成肌分化相关蛋白MyoG、MyoD1和MYH的表达。上述研究结果表明,一定浓度的NMN在一定时间内可以促进C2C12细胞成肌分化。本研究丰富了NMN的生理作用,为后续NMN在畜牧产业的应用提供新的参考基础。

来源：2022年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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