农业生物技术学报

作者：刘洋, 海勒思, 刘永斌, 刘春霞, 曹俊伟, 张焱如

单位：1 内蒙古农业大学 生命科学学院,呼和浩特 010018;2 内蒙古自治区生物制造重点实验室,呼和浩特010018;3 内蒙古自治区农牧业科学院,呼和浩特 010031

关键词：端粒逆转录酶(TERT),蒙古羊输卵管上皮细胞(SOECs),体外增殖,脂质体法,

基金：内蒙古自治区科技重大专项(2020ZD0003)

输卵管上皮细胞(oviduct epithelial cells, OECs)能够提供理想的生理生化环境、支持胚胎发育,但其体外增殖能力较弱,无法满足实验研究与应用需求。本研究将外源性端粒逆转录酶基因(telomerase reverse transcriptase, TERT)转入蒙古羊(Ovis aries)输卵管上皮细胞(sheep OCEs, SOECs)并观察TERT基因修饰的蒙古羊输卵管上皮细胞(TERT-SOECs)的体外增殖能力。首先经酶消化法建立了SOECs系,将重组质粒pCI-neo-TERT以脂质体法转染至原代SOECs;经G418抗性筛选,得到稳定表达TERT基因的SOECs,qPCR检测了TERT基因在细胞中的表达;免疫荧光法检测上皮细胞特异性标志物角蛋白18 (cytokeratin18, CK18)并对TERT-SOECs进行生长曲线拟合和活性测定。结果显示,成功将TERT基因导入了SOECs,PCR检测表明细胞表达了276 bp的TERT基因片段,TERT基因表达量极显著高于未转染和转染pCI-neo空载体的SOECs (P<0.001);转染后的细胞仍保留了SOECs的生物学特性,P5 TERT-SOECs倍增时间为46.61 h,而P5 SEOCs倍增时间为65.03 h,TERT-SOECs体外增殖速度明显高于SOECs。综上,本研究成功建立了有较强体外增殖能力的TERT-SOECs系,为种质资源细胞库提供了种子细胞。

来源：2022年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2022年第4期