农业生物技术学报

作者：黄静, 王晨一, 兰彬源, 丁新伦, 张帅, 吴建国

单位：1 漳州职业技术学院 食品工程学院,漳州 363000;2 福建农林大学 媒介病毒研究中心,福州 350002

关键词：水稻病毒,多重RT-PCR,病毒检测,

基金：国家自然科学基金青年科学基金(31901851); 福建省科技计划面上项目(2109J01371); 国家杰出青年科学基金(32025031); 漳州市自然基金项目(ZZ2021J02); 2020年度漳州市访学进修资助计划(漳人社(2020) 27号)

农业生产上水稻(Oryza sativa)病毒病的发生大多为复合侵染,仅通过病毒病症状学的诊断往往很难准确分辨,因此开发快速精准诊断多种水稻病毒病的检测技术,对于水稻病毒病害的精准测报具有重要应用价值。基于此,本研究根据当前我国南方农业生产上常见的6种水稻病毒,即水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)、水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus, RGSV)、水稻矮缩病毒(Rice dwarf virus, RDV)、水稻锯齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus, RRSV)、水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus, RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV)的外壳蛋白(coat protein, CP)的基因序列,设计了特异性检测引物,建立了可同时检测6种病毒的一步法多重逆转录PCR (reverse transcription-PCR, RT-PCR)体系,其结果表明一步法多重RT-PCR检测反应体系(总体系20 μL)中,RSV上下游引物浓度为10 μmol/L的体积加量为0.6 μL、RDV为0.4 μL、RGSV为0.3 μL、RRSV为0.4 μL、RBSDV为0.6 μL、SRBSDV为0.2 μL;Onestep RT/Taq Mix的用量确认为0.75 μL,5×反应缓冲液用量为4 μL,模板量为1 μg。多重RT-PCR参数设定为RNA反转录50 ℃ 30 min;预变性94 ℃ 2 min;94 ℃变性 30 s;退火温度58 ℃,30 s;72 ℃延伸1 min,35个循环;72 ℃终延伸10 min。研究结果表明该体系可同时高效精准地检测6种水稻病毒,极大地提高了检测效率;该方法可广泛应用于实验室精准检测、田间水稻病毒病和传毒介体的检测,也为相关产品的研发提供技术支持和参考依据。

来源：2022年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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