农业生物技术学报

作者：豆子航, 李秀丽, 庞洪泽, 韩颖, 雷白时, 赵款, 庞敬红, 袁万哲

单位：1 河北农业大学 动物医学院,保定 071001; 2 河北省兽医生物技术创新中心,保定 071001; 3 河北伯瑞动物药业有限公司,石家庄 050800

关键词：α干扰素(IFNα),β防御素2 (AvBD2),毕赤酵母,融合蛋白,抗菌活性,抗病毒活性,

基金：2020 年度石家庄市重点研发项目(201208)

鸭(Anas platyrhynchos) α 干扰素(interferon α, IFNα)具有广谱的抗病毒活性,禽 β 防御素 2 (avian β -defensin 2, AvBD2) 具 有 广 谱 的 抗 菌 活 性 。 本 研 究 利 用 毕 赤 酵 母 (Pichia pastoris) 分 泌 表 达 鸭 IFNα - AvBD2 融合蛋白并明确 IFNα-AvBD2 的生物学活性,对于现有无抗养殖条件下的鸭疫病防控具有重要意 义 。 本 课 题 组 在 前 期 工 作 中 已 成 功 构 建 了 原 核 表 达 质 粒 pET32a-AplIFNα -AvBD2,并 在 大 肠 杆 菌 (Escherichia coli)中成功表达。本研究以实验室保存的 pET32a-AplIFNα-AvBD2 为模板,通过 PCR 方法扩增得到 AplIFNα-AvBD2 成熟蛋白的基因片段,构建重组质粒 pPICZαA-AplIFNα-AvBD2;将线性化的重组 质粒电转化至毕赤酵母 KM71H 感受态细胞,阳性重组菌经甲醇诱导表达,对表达产物进行体外生物学活 性研究。SDS-PAGE 和 Western blot 结果显示,AplIFNα-AvBD2 重组蛋白分子量约为 24 kD;琼脂扩散法和微量稀释法表明重组蛋白对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌有较强的抗菌活性;细 胞病变抑制法检测重组蛋白抗病毒活性为 1.2×105 U/mL,比活性为 5.2×105 U/mg;MTT 细胞毒性试验显 示重组蛋白对非洲绿猴肾细胞(Vero)无毒。上述结果说明,AplIFNα-AvBD2 可在毕赤酵母中分泌表达, 同时具有抗菌活性和抗病毒活性。本研究为 AplIFNα-AvBD2 的进一步应用提供了基础资料。

来源：2022年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2022年第5期