农业生物技术学报

作者：纪晓霞, 李帅, 曹西月, 张崇昊, 张源淑

单位：南京农业大学 农业部动物生理生化重点开放实验室,南京 210095

关键词：真核表达,脂质体转染,血管紧张素转化酶 2 (ACE2),细胞株,鸭,

血 管 紧 张 素 转 换 酶 2 (angiotensin-converting enzyme 2, ACE2) 是 肾 素 血 管 紧 张 素 系 统 (renin angiotensin system, RAS)的负调节分子和 SARS-coV-2 等冠状病毒的功能性受体。为丰富禽类鸭(Anas platyrhynchos) ACE2 蛋白的研究内容,探寻该蛋白与禽冠状病毒的关系,本研究利用 PCR 扩增鸭 ACE2 基 因编码区全长 ,通过同源重组与 pcDNA3.1(+)载体连接 ,构建真核表达体系 ,确定中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞的新霉素(geneticin, G418)最佳筛选浓度 ,pcDNA3.1(+)-ACE2 转染细胞后通过 G418 加压筛选单克隆细胞 ,采用 Western blot 和免疫荧光法对获得的细胞株进行鉴定 ,建立稳定表达鸭 ACE2 蛋白的细胞株,并测定其 ACE2 重组蛋白的酶活性。结果显示,成功克隆了鸭 ACE2 基因,其编码区 全长为 2 435 bp;成功构建 pcDNA3.1(+)-ACE2 真核表达质粒,单酶切验证 7 863 bp 左右出现单一条带;脂 质体法将重组质粒转染入 CHO 细胞 ,可表达外源 ACE2 重组蛋白 ;获得 3 株单克隆细胞株 ,分别命名为 pcDNA3.1(+)-ACE2-1、pcDNA3.1(+)-ACE2-2、pcDNA3.1(+)-ACE2-3;单克隆细胞株中提取的 ACE2 重组蛋 白具有较高的酶活性。本研究构建的鸭 ACE2 真核表达体系以及获得的可以稳定表达 ACE2 重组蛋白细 胞株,为鸭 ACE2 蛋白与冠状病毒等生物学功能的研究提供了基础,丰富了该蛋白的相关理论。

来源：2022年第7期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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