农业生物技术学报

作者：于松尼, 贾鹏飞, 李雅华, 咸洪泉

单位：1 青岛农业大学 生命科学学院,青岛 266109;2 山东省应用真菌重点实验室,青岛 266109

关键词：粉红聚端孢,几丁质酶 Trchi2,毕赤酵母,酶学性质,

粉红聚端孢(Trichothecium roseum)是一种重要的菌寄生真菌 ,能够通过菌寄生作用抑制病原微 生物的生长,可以有效防治多种植物病原真菌。几丁质酶(chitinase, chi)在粉红聚端孢寄生和抑菌过程中 发挥重要作用,本研究旨在实现粉红聚端孢几丁质酶 Trchi2 基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达,并明 确其酶学性质 ,采用逆转录 PCR (reverse transcriptase PCR, RT-PCR)克隆粉红聚端孢几丁质酶 Trchi2 基 因,构建毕赤酵母重组表达载体,转入毕赤酵母 GS115,筛选获得的酵母转化子通过甲醇诱导表达,获得 Trchi2 蛋白 ,测定其几丁质酶活性并进行酶学性质的研究。本研究成功构建了毕赤酵母重组表达载体 pPIC9K-Trchi2,获得了分泌表达几丁质酶 Trchi2 的工程菌 GS115-Trchi2-2-8;诱导培养 7 d 产酶量最高,酶 活力达 3.96 U/mL,表达的几丁质酶 Trchi2 表观分子量为 50 kD,酶解胶体几丁质的产物为几丁二糖 ;在45 ℃、pH 6.0 时酶活性最高,在 pH 4~7.5、30~55 ℃条件下相对稳定;当催化反应体系中存在 50 mmol/L 的 Ag+ 、Hg2+ 、Cu2+ 、Fe2+时,Trchi2 酶活性受到强烈抑制。本研究对几丁质酶 Trchi2 的基本性质进行了研究, 为其结构功能的深入发掘和生产应用提供了理论依据。

来源：2022年第7期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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