农业生物技术学报

作者：田沂民, 吴建祥, 陈磊, 罗金燕, 滕凯, 叶军, 杜伟, 于翠

单位：1 上海海关 动植物与食品检验检疫技术中心,上海 200135;2 浙江大学 农业与生物技术学院,杭州 310058;3 上海农业技术推广服务中心,上海 201103;4 上海海关 动植物检疫监管处,上海 200082;5 宁夏回族自治区农业技术推广总站, 银川 750001

关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV),SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR,种子,灵敏度,特异性,

基金：上海市科技兴农项目(2019-02-08-00-08-F01150); 宁夏回族自治区重点研发计划(2020BBF03004)

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV)是我国重要的检疫性植物种传病毒,在世界各地均有发生,造成西瓜(Citrullus lanatus)、黄瓜(Cucumis sativus)、甜瓜(Cucumis melo)等作物的严重经济损失。CGMMV可由种子直接传播至下一代秧苗,为保障种子贸易顺利进行,有必要建立快速而准确的病毒检测方法。本研究以截获的带毒种子为材料,针对CGMMV建立了SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法,其中设计筛选特异、灵敏的引物是关键。利用多次筛选得到的引物对建立了SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法,实验结果表明该方法能够特异地检测CGMMV,不与其他侵染葫芦科植物的病毒发生交叉反应;灵敏度是RT-PCR方法的1 000倍,是TaqMan探针实时荧光RT-PCR方法的100倍;且整个检测过程可在2.5 h内完成,是一种快速、灵敏、可靠的检测方法;应用该方法及TaqMan实时荧光RT-PCR方法同时对国内外198份种苗样品进行检测,结果显示kappa值大于0.82,说明两种方法具有高度一致性,本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR方法有效、可靠,为种子快速通关提供新的技术手段。

来源：2022年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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