农业生物技术学报

作者：张建禹, 王晓彤, 耿沙, 毋志浩, 任思杨, 李瑞梅, 姚远, 郭建春, 刘姣, 胡新文

单位：1 海南大学 生命科学学院,海口 570228;2 中国热带农业科学院 热带生物技术研究所/海南热带农业资源研究院,海口 571101;3 海南大学 热带作物学院,海口 570228

关键词：木薯,木薯AT-hook核定位蛋白19 (MeAHL19),酵母双杂交,互作蛋白,双分子荧光互补,

基金：国家重点研发项目(2019YFD1001105); 国家自然科学基金(32001602); 国家现代农业产业技术体系(CARS-11)

AT-hook核定位蛋白(AT-hook motif nuclear localized protein, AHL)是一类具有AT-hook基序的核定位蛋白,在植物生长发育过程中起着重要的调控作用。为探究木薯(Manihot esculenta) AHL家族成员MeAHL19的生物学功能以及其在蛋白互作网络中的作用。本研究采用T4连接法构建诱饵载体pGBKT7-MeAHL19,利用酵母(Saccharomyces cerevisiae)双杂交技术(yeast two-hybrid, Y2H)在木薯cDNA文库中筛选MeAHL19的互作蛋白,采用实时荧光定量PCR技术分析MeAHL19及其互作蛋白的基因表达模式。结果显示：酵母双杂交筛库获得20个阳性克隆,经PCR扩增并测序比对后鉴定出8个候选互作蛋白,Y2H回转验证发现,MeAHL19蛋白与核酮糖二磷酸羧化酶小链(ribulose bisphosphate carboxylase small chain, RBCS)蛋白可在体外互作;双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation, BiFC)实验进一步验证了MeAHL19与RBCS在本氏烟草(Nocotinan benthamiana)叶肉细胞中发生互作。基因表达模式分析表明,MeAHL19主要在根中表达,而RBCS在根、茎和叶中的表达水平基本一致;MeAHL19与RBCS在木薯中共同响应非生物胁迫和外源激素应答。本研究为进一步探究MeAHL19在木薯逆境响应过程中的生物学功能提供了科学参考。

来源：2022年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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