农业生物技术学报

作者：李雪, 李晋海, 王兰花, 戚朵, 郭萌萌, 周雪平, 吴建祥

单位：1 浙江大学 生物技术研究所/水稻生物学国家重点实验室,杭州 310058; 2 丘北县农业绿色发展服务中心,丘北 663200

关键词：马铃薯Y病毒属,夜来香花叶病毒(TelMV),东亚西番莲病毒(EAPV),西番莲重型斑驳相关病毒(PFSMaV),单克隆抗体,斑点ELISA (Dot-ELISA),组织印迹ELISA (Tissue print-ELISA),

基金：国家重点研发计划项目(2019YFD1001800); 国家自然科学基金(31772125)

马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus, TelMV)、东亚西番莲病毒(East Asian passiflora virus, EAPV)和西番莲重型斑驳相关病毒(Passion fruit severe mottle-associated virus, PFSMaV)严重危害我国西番莲(Passiflora edulis)产业。迄今植物病毒没有有效的防治药剂,而病毒检测技术是植物病毒防控手段建立的关键。本研究利用田间采集的TelMV、EAPV和PFSMaV三种病毒复合侵染的西番莲,从病叶提纯病毒粒子,以混合病毒粒子作为BALB/c小鼠(Mus musculus)的免疫原,通过杂交瘤技术获得能特异、广谱检测这3种病毒的单克隆抗体。Western blot检测发现,研制的4株单克隆抗体能同时识别TelMV、EAPV和PFSMaV的衣壳蛋白。进一步以制备的病毒单抗为检测抗体,建立用于快速检测这3种病毒的血清学检测方法,即斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和组织印迹酶联免疫吸附试验(Tissue print-ELISA)。特异性和广谱性测定结果表明,建立的2种血清学方法均能简单快速、特异灵敏、广谱高效地检测西番莲中的TelMV、EAPV和PFSMaV,而检测感染同属的李痘病毒(Plumpox virus, PPV)、马铃薯Y病毒(Potato Virus Y, PVY)、马铃薯A病毒(Potato Virus A, PVA)和芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus, TuMV)病叶、感染黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)和西番莲潜隐病毒（Passiflora latent virus, PLV)的病叶及健康西番莲叶片均呈阴性反应。灵敏度测定结果表明,Dot-ELISA方法检测病叶粗提液的灵敏度高达1∶20 480(W/V, g/mL)倍稀释,即绝对检出量为0.097 6 ng感病植物组织。田间样品的检测结果表明,建立的2种血清学方法能准确、广谱、灵敏地用于检测侵染西番莲的3种马铃薯Y病毒属病毒,其结果与RT-PCR的符合率达到100%。本研究为TelMV、EAPV和PFSMaV三种病毒的检测诊断、无毒种子种苗生产及其科学防控提供技术支持。

来源：2022年第9期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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