农业生物技术学报

作者：曾红梅, 庞雪晴, 唐诗, 杨泽晓, 罗燕, 王印, 姚学萍, 李丽

单位：1 四川农业大学 动物医学院,成都 611130; 2 动物疫病与人类健康四川省重点实验室,成都 611130; 3 四川省动物疫病预防控制中心,成都611130

关键词：兔出血症病毒2 (RHDV2),VP60蛋白,单克隆抗体,Western blot,

基金：国家自然科学基金(31402222)

兔病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease, RHD)又称兔瘟,是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)感染引起的兔(Oryctolagus cuniculus)急性出血性传染病。为制备RHDV2的特异性单克隆抗体(McAb),进而探索其与经典兔瘟病毒(RHDV)鉴别诊断技术,本研究原核表达纯化RHDV2 VP60蛋白(pET-32a-R2VP60蛋白)和RHDV VP60蛋白(pET-32a-R1VP60蛋白),以pET-32a-R2VP60蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),并分别以pET-32a-R1VP60蛋白与pET-32a-R2VP60蛋白为包被原建立特异性的RHDV2单克隆抗体筛选间接ELISA方法,采用常规杂交瘤细胞融合技术,通过克隆、亚克隆、腹水制备、效价测定、Western blot分析、血凝-血凝抑制试验以及亚型鉴定成功筛选出一株抗RHDV2的杂交瘤细胞株,命名为2A1。结果显示,2A1融合细胞的染色体约为100条,分泌IgG3亚型McAb,轻链为Kappa亚型;杂交瘤2A1的抗体分泌稳定,腹水纯化McAb效价高,特异性良好,其间接ELISA效价高达1∶128 000。Western blot分析显示McAb 2A1仅与RHDV2病毒粒子和pET-32a-R2VP60蛋白反应,与RHDV1病毒粒子和pET-32a-R1VP60蛋白反应阴性。血凝(hemagglutination, HA)与血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)实验表明2A1纯化McAb可有效抑制RHDV2的血凝作用,HI效价高达10log2。本研究制备的RHDV2特异性McAb 2A1,为RHDV2特异快速的血清学诊断方法建立和试剂盒研发提供了科学材料。

来源：2022年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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