农业生物技术学报

作者：谢学文, 刘世程, 石延霞, 张胜丰, 陈利达, 柴阿丽, 范腾飞, 李磊, 李宝聚

单位：1 中国农业科学院 蔬菜花卉研究所,北京 100081; 2 徐州市贾汪区泰瑞农业科技有限公司,徐州 221133

关键词：茄匍柄霉,环介导等温扩增(LAMP),快速分子检测,

基金：国家重点研发计划(2020YFD1000300); 宁夏回族自治区重点研发计划(2021BBF03002); 国家大宗蔬菜产业技术体系(CRS-25); 中国农业科学院创新工程项目(CAAS-ASTIP-IVFCAAS); 农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室项目

匍柄霉(Stemphylium solani)是一种重要的植物病原真菌,可侵染多种作物。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术具有简便、准确、快速等突出优点,在病原菌检测领域有广泛应用。本研究以SYBR GreenⅠ为指示剂,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-2-phosphate dehydrogenase, gpd)为检测靶标基因设计6条引物(2条内引物FIP/BIP, 2条外引物F3/B3, 环引物LF25/LB25)进行LAMP扩增,同时通过环引物加速反应,建立了一套茄匍柄霉LAMP快速检测体系。特异性验证结果显示,仅16株茄匍柄霉有阳性扩增,具有较高的特异性。灵敏度检测结果显示,该检测体系灵敏度达2.4 pg/μL,显著高于普通PCR检测技术。环引物加速LAMP反应结果表明,加入环引物能使反应时间缩短至27 min,可有效加速LAMP反应。通过钙黄绿素进行显色反应,在自然光下仅模板为茄匍柄霉的反应液变为绿色,其余反应液均为橙色。采用该体系检测茄匍柄霉接种后番茄(Lycopersicon esculentum)叶片病原菌含量动态变化,接种病原菌12 h时,该体系即有阳性显色反应,接种后颜色随时间推移逐渐加深,与接种病原菌后叶片发病情况的规律相同。该反应结果不借助其他仪器即可观察,环引物加速反应使检测时间进一步缩短至27 min,能够快速、准确反应病原菌含量。该体系在匍柄霉快速检测方面具有较强的优势,可用于病害潜伏、未显症期的快速检测,对及时、科学防治茄匍柄霉叶斑具有重要意义。

来源：2022年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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