农业生物技术学报

作者：汪枫婷, 孙静, 刘晨, 程茵, 蒋昕, 祝艺然, 卫芳芳, 章先, 宋厚辉, 程昌勇

单位：浙江农林大学 动物科技学院·动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室,杭州 311300

关键词：减毒单增李斯特菌,宫颈癌,免疫疗法,疫苗载体,ΔAB-E7,

基金：国家自然科学基金(31872620; 31972648; 32172849; 32002358); 浙江农林大学基本科研业务费(2020KJ004); 浙江省自然科学基金(LZ19C180001)

减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)作为一种安全高效的异源抗原递呈载体可用于肿瘤免疫治疗。缺失重要毒力基因是目前较为成熟的李斯特菌减毒策略。基因缺失减毒菌株ΔactAΔinlB (简称ΔAB)是其中一种较为成熟、安全的李斯特菌肿瘤免疫治疗疫苗载体。本研究旨在ΔAB基础上,利用肿瘤相关抗原与重要毒力因子融合表达的创新手段,构建一种能高效表达和递呈宫颈癌相关抗原E7的肿瘤疫苗载体(ΔAB-E7),以肿瘤生物学方法评估ΔAB-E7在小鼠(Mus musculus)宫颈癌模型中的免疫治疗效果。本研究利用细菌分子遗传操作技术构建ΔAB,在ΔAB基础上构建李斯特菌溶血素O (Listeriolysin O, LLO)和肿瘤抗原E7融合表达的ΔAB-E7;通过Western blot验证ΔAB-E7菌株中的E7抗原能否与LLO融合表达;利用细菌体外培养以及吞噬细胞内增殖实验研究体外生长能力,细胞内复制和增殖能力;通过小鼠脏器内细菌增殖实验评估ΔAB及ΔAB-E7在小鼠体内的增殖能力;构建小鼠宫颈癌模型,通过记录肿瘤模型在小鼠体内的生长趋势评价ΔAB-E7的免疫治疗效果。结果显示,ΔAB-E7菌株的E7抗原能与LLO融合表达并正常分泌;ΔAB及ΔAB-E7菌株在体外生长能力与野生型无显著差异,并且在吞噬细胞中保持稳定的增殖能力;ΔAB及ΔAB-E7感染小鼠后致病力显著下降,在小鼠脏器中的增殖能力显著降低,表明其毒力减弱,在小鼠感染模型中具有安全性;在小鼠宫颈癌模型中,ΔAB-E7免疫治疗组小鼠肿瘤的生长趋势明显较对照组更慢,表明ΔAB-E7抑制肿瘤生长,展现了良好的免疫治疗效果。本研究制备了一种基于减毒李斯特菌的小鼠宫颈癌治疗载体疫苗,为人类宫颈癌及其他恶性肿瘤的免疫治疗提供技术支持。

来源：2022年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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