农业生物技术学报

作者：陈芳芳, 于凤梅, 张俊, 谈阳, 刘翠艳, 桂亚萍

单位：安徽农业大学 动物科技学院/安徽省人畜共患病实验室,合肥 230036

关键词：牛,恒定链(Ii),牛白细胞抗原(BoLA),结合,共定位,

基金：安徽省自然科学基金(2108085MC116); 安徽省教育厅重点项目(KJ2020A0124)

牛白细胞抗原(bovine leukocyte antigen, BoLA),又名主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC),其Ⅱ类分子及其伴侣蛋白恒定链(invariant chain, Ii)在加工和递呈抗原肽中起关键作用。为了解在此过程中BoLAⅡβ链与Ii结合和在细胞内定位的特征,本研究提取了淮北黄牛(Bos taurus)血细胞mRNA并反转录为cDNA,应用PCR技术扩增牛Ii与BoLAⅡβ链及结构域的基因片段,并分别构建相应的真核和原核表达质粒。利用原核表达系统进行蛋白的表达和纯化,应用拉下法和Western blot检测Ii结合BoLAⅡβ及其片段的结合关系。应用激光共聚焦显微镜观察Ii与BoLAⅡβ链及其片段在细胞内共定位。结果显示,构建的含牛Ii、BoLAⅡβ、BoLAⅡβ(β1β2)和BoLAⅡβ(TC)基因的重组质粒转化细菌,经诱导能正确表达蛋白并得到纯化。BoLAⅡβ和BoLAⅡβ(β1β2)具有结合Ii的活性功能,而BoLAⅡβ(TC)却无此功能。同时,在真核细胞内Ii能与BoLAⅡβ及其主要结构域BoLAⅡβ(β1β2)和BoLAⅡβ(TC)共定位。综上所述,BoLAⅡβ的β1β2是结合Ii的关键结构域,而BoLAⅡβ的β1β2和TC结构域均具有与Ii在细胞内共定位功能。本研究为进一步研究牛BoLA分子与Ii在免疫应答中的转运及其机理提供了重要实验依据。

来源：2022年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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