农业生物技术学报

作者：张涛, 王会宝, 孙燕燕, 翟国元, 崔燕

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070;2 中农威特生物科技股份有限公司,兰州 730046;3 兰州兽研生物科技有限公司,兰州 730046

关键词：A型塞内卡病毒(SVA),病毒结构蛋白1 (VP1),单克隆抗体,胶体金试纸条,

基金：甘肃省青年科学基金(20JR10RA475)

A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)是近年新发现的一种病原体,严重危害着我国养猪业的健康发展。为制备SVA病毒结构蛋白1 (viral structural protein 1, VP1)单克隆抗体(monoclonol aitibody, McAbs)及建立一种快速、高效、简便的SVA检测方法,本研究利用RT-PCR方法扩增SVA VP1基因,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,诱导表达并纯化得到重组VP1蛋白。以重组VP1蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),筛选获得2株稳定分泌抗SVA VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2E10, 3E4)。通过2E10和3E4免疫小鼠获得腹水型McAbs并纯化,利用间接免疫荧光实验(indirect immunofluorescence assay, IFA)和Western blot鉴定McAbs。以2E10 McAbs作为捕捉抗体,山羊抗鼠IgG与3E4 McAbs分别作为质控线(C线)与检测线(T线)试制SVA胶体金试纸条。结果显示,重组SVA VP1蛋白主要以包涵体形式表达,分子质量约为43 kD。抗体亚型鉴定结果显示,2E10重链亚型为IgG2b,3E4重链亚型为IgG2a,轻链均为κ链。IFA和Western blot结果显示,制备的McAbs与SVA特异性结合。试纸条检测结果显示,试纸条能特异性地检测SVA,而与口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus, FMDV)、猪繁殖障碍与呼吸症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪圆环病毒2型病毒(Porcine cirovirus type 2, PCV2)无交叉反应;最低检测病毒含量为5×101.13 TCID50/mL;该方法与qPCR方法检测临床样品的符合率达96.55%。以上结果表明,本研究制备的基于VP1单克隆抗体的胶体金试纸条为SVA的即时检测提供了新方法。

来源：2022年第11期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2022年第11期