农业生物技术学报

作者：刘东伟, 宋嘉庆, 潘鑫, 闫书味, 李轲, 范沛, 高飞, 张晓婷, 代君丽, 李洪连

单位：1 河南农业大学 植物保护学院,郑州450002;2 小麦玉米作物学国家重点实验室,郑州 450046;3 河南工业大学 生物工程学院,郑州 450001

关键词：真菌病毒,假禾谷镰孢巨型双链RNA病毒1 (FpgMBV1),P4蛋白,原核表达,多克隆抗体,

基金：国家自然科学基金国际(地区)合作与交流项目(31961143018); 河南省科技攻关计划(农业领域)项目(212102110138); 2018年度河南省高等学校青年骨干教师培养计划(2018GGJS032); 河南农业大学科技创新基金(KJCX2020A14)

假禾谷镰孢巨型双链RNA病毒1 (Fusarium pseudograminearum megabirnavirus 1, FpgMBV1)是从假禾谷镰孢(Fusarium pseudograminearum)弱毒菌株FC136-2A中发现的一种真菌病毒。FpgMBV1共编码4个蛋白质,其中FpgMBV1-P4由268个氨基酸残基组成,功能未知。本研究设计特异性引物,采用反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法从菌株FC136-2A的菌丝中扩增FpgMBV1-P4基因,构建原核表达载体pGEX4T-FpgMBV1-P4并转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)菌株,在25 ℃以0.5 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)诱导表达重组蛋白。结果表明,FpgMBV1-P4基因长为807 bp,重组表达的融合蛋白分子量约为60 kD,与预期大小相符。将该重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔(Lepus sinensis),获得抗血清,采用间接ELISA测定其效价达1∶160 000,能够特异性检测到假禾谷镰孢菌丝中约36 kD的FpgMBV1-P4蛋白。研究结果为深入分析FpgMBV1-P4的结构和功能及进一步探讨FpgMBV1与假禾谷镰孢菌的相互作用提供了基础。

来源：2022年第11期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2022年第11期