农业生物技术学报

作者：周一媚, 董婉玉, 王馨雨, 郑谋凤, 王志鹏, 祝徐航, 周莹珊, 杨永春, 宋厚辉, 王晓杜

单位：1 浙江农林大学 动物科技学院·动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室,杭州 311300; 2 浙江省瑞安市农业农村局,瑞安 325200

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV),间接ELISA,中和抗体,相关性,

基金：国家自然科学基金(31972656); 浙江省三农六方项目(2021SNLF023); 浙江省重点研发专项(2019C02052; 2018C02028); 中国大学生创新创业训练项目(201910341040; 202010341038)

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的高度传染性、高致死率疾病,导致3~10日龄仔猪(Sus scrofa)严重腹泻,该病的防控主要依赖于母猪疫苗免疫后乳汁中和抗体的保护作用,而快速地、高通量检测中和抗体方法有利于该病的防控。本研究通过方阵滴定、ELISA反应条件筛选、敏感性试验、特异性试验、符合性试验和中和试验等,确定基于PEDV基因Ⅱ型S蛋白中和表位的间接ELISA反应条件：抗原最佳包被浓度为0.2 μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100,血清最佳作用时间30 min,二抗最佳稀释度为1∶6 000,二抗最佳作用时间为60 min,底物最佳作用时间为10 min。该ELISA方法与临床常见病原(猪瘟病毒, 伪狂犬病毒, 猪繁殖与呼吸综合征病毒)的特异性抗体无交叉反应,组间和组内试验具有较好重复性。该ELISA方法与中和试验的结果关联分析表明,其直接正相关公式为：Y=0.370 8X+1.377 2 (X为S/P值, Y为lg(1/中和效价-32), R2=0.963),相比中和试验的结果,本研究建立的ELISA方法敏感性为94.74%,特异性为91.67%,Kappa值为0.93。本研究建立的间接ELISA方法为临床PEDV中和抗体高通量检测和疫苗免疫效果评估提供了候选工具。

来源：2022年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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