农业生物技术学报

作者：夏立叶, 姜焱, 单虎, 李桂梅

单位：1 青岛农业大学 动物医学院,青岛 266109; 2 南京海关,南京 210001; 3 山东省预防兽医学重点实验室, 青岛 266109

关键词：猪繁殖与呼吸综合征,液相芯片技术(xMAP technology),荧光微球,抗体检测,酶联免疫吸附测定(ELISA),

基金：国家重点研发计划(2016YFD0501104); 山东省高等学校优势学科人才团队培育计划项目

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是危害养猪(Sus scrofa)业最严重的病毒性疾病之一。为建立一种猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的高通量血清学检测方法,给同时大量监测PRRSV提供技术支撑,本研究通过液相芯片检测技术(multi-analyte profiling solve for unknown x, xMAP technology)建立一种PRRSV抗体检测方法。首先将PRRSV-N (nucleocapsid)蛋白与羧基化的荧光微球偶联,验证偶联效率,与血清样本反应,添加捕获生物素化的检测抗体,最后利用Luminex 200分析系统检测微球的荧光信号,初步建立液相芯片检测抗体技术。接下来,为确定检测阈值,测定32份1∶100稀释无特定病原(specific pathogen free, SPF)猪血清样本的中值荧光强度(median fluorescence intensity, MFI)和标准偏差,计算出阈值。对最佳结合蛋白量进行了探索。对该方法的重复性进行了验证;与商品化试剂盒对比,对该方法的灵敏性进行了研究。对水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus, VSV)和伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)阳性血清进行检测,以验证方法的特异性。分别用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)试剂盒和液相芯片检测方法检测83份临床采集的猪血清样本,验证两种方法检测结果的一致性。研究结果表明,该方法MFI检测阈值为103.22,最佳结合蛋白浓度为8 μg/1.25×106个微球;批间和批内变异系数均在10%以内,检测方法的重复性良好;与ELISA试剂盒相比,液相芯片检测方法敏感性更高,检测3种不同疾病的阳性血清,证明建立的液相芯片检测方法具备良好的特异性。同时用ELISA和液相芯片检测技术对83份临床采集的猪血清样本进行检测,结果显示,两种检测方法一致性为91.57%。说明利用液相芯片技术高通量检测PRRSV的方法建立成功,本研究为PRRSV的血清学检测提供了一种新方法,也为其他病原体的检测提供了借鉴。

来源：2021年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2021年第1期