农业生物技术学报

作者：王莲哲, 刘士俊, 刘佳乐, 洪军

单位：河南城建学院 生命科学与工程学院，平顶山 467000

关键词：抗菌肽Cathelicidin,毕赤酵母,抑菌活性,分泌表达,

基金：基金项目：河南省高等学校重点科研项目计划(19A180011)

树蛙(Rhacophorus)抗菌肽Cathelicidin是一类具有广谱抗微生物活性的小分子多肽，在医疗、畜牧等方面有潜在应用价值，但其真核表达少有报道。本研究根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的密码子偏爱性进行优化，合成树蛙抗菌肽Cathelicidin的目的基因，与表达载体pPIC9K连接后电击转化至毕赤酵母 GS115，通过高浓度G418筛选高拷贝酵母转化子，通过PCR和反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)验证，获得的阳性转化子使用1%甲醇诱导表达72 h后，收集培养液上清液进行体外抑菌活性检测及毒性分析。结果表明，树蛙抗菌肽Cathelicidin在毕赤酵母GS115中获得成功表达，分泌表达的抗菌肽对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherchia coli)具有抑菌活性，最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)分别为(1.175±0.002)和(2.35±0.001) μg/mL，最小抑菌浓度下没有细胞溶血性。本研究为新型树蛙抗菌肽的工业生产提供基础数据支持。

来源：2021年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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