农业生物技术学报

作者：梁雨欣, 李忠鹏, 张春雨, 侯吉超, 李小宇, 王永志

单位：1 吉林省农业科学院 植物保护研究所,公主岭 136100;2 中国农业科学院 植物保护研究所,北京 100193;3 吉林农业大学 植物保护学院,长春 130118

关键词：Bar基因,单克隆抗体,抗原表位,双抗夹心ELISA (DAS-ELISA),

基金：吉林省农业科技创新工程项目(CXGC2018DC003); 吉林省省级产业创新专项资金项目(2017C057-1); 吉林省科技厅重点研发项目(20180201084SF)

随着转基因大豆(Glycine max)市场的扩大,我国对转基因大豆的食品安全、环境风险等问题争议日渐加剧。越来越多的国家要求对转基因食品进行标识,部分国家对转基因成分含量亦有要求。为了建立转Bar基因大豆的快速、有效检测方法,对转Bar基因大豆进行定量检测,本研究以纯化的膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase, PAT)蛋白为抗原免疫小鼠(Mus musculus),成功制备了18株特异性良好的PAT单克隆抗体(monoclonal antibody, MAb),利用在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的PAT分段蛋白筛选到一组能进行夹心ELISA的配对单克隆抗体9F5和3G12,并以这对单抗为基础建立了PAT快速定量双抗夹心ELISA (double antibody sandwich ELISA, DAS-ELISA)检测方法。该方法以9F5为捕获抗体包被酶标板,检测抗体3G12经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记后以2 μg/mL的工作浓度与抗原在37 ℃共同孵育30 min,室温避光显色15~20 min。该检测方法检测限为1.69 ng/mL,对PAT蛋白的检测范围为0.5~8.0 μg/mL,板内板间变异系数均小于10%。该法灵敏度高、稳定性好,1 h即可完成检测,为转Bar基因大豆的快速定量检测提供了技术支撑。

来源：2021年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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