农业生物技术学报

作者：许发芝, 朱正萱, 丁小玲

单位：安徽农业大学 兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室,合肥 230036

关键词：猪,IgG CH2,新生儿Fc受体(FcRn),细胞定位,互作关系,

基金：安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2015A078); 安徽省自然科学基金(2008085MC91); 高校优秀青年人才项目(gxyq2018005)

新生儿Fc受体(neonatal Fc receptor, FcRn)能够特异性识别并跨越黏膜屏障转运IgG。为了确定猪(Sus scrofa) FcRn与IgG抗体Fc段CH2结构域的互作关系,本研究通过逆转录PCR技术克隆获得猪IgG抗体Fc段CH2基因片段,并将其亚克隆至原核表达载体pEGX-4T-1,经异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)诱导融合蛋白表达并通过谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase, GST)亲和柱纯化。同时将IgG CH2基因片段亚克隆至真核表达载体pEGFP-C1,通过共转染确定IgG CH2与FcRn在非洲绿猴(Chlorocebus sabaeus)肾细胞(COS-7)中的细胞共定位,免疫共沉淀验证IgG CH2与FcRn的相互作用;进一步通过ELISA方法检测CH2与FcRn在不同pH值下的结合力。结果表明,克隆获得猪IgG CH2基因全长330 bp,编码110个氨基酸。诱导表达的融合蛋白GST-CH2相对分子量为38.4 kD,该蛋白在诱导菌体中以可溶性和包涵体两种形式存在。激光共聚焦观察显示,IgG CH2与FcRn共定位于细胞质中,具有共聚集现象。免疫共沉淀显示,通过标签蛋白GFP和Flag,在所有的共沉淀条带中,均能检测到对应的目的条带,说明IgG CH2能够结合FcRn。ELISA结果表明,IgG CH2与FcRn的结合呈现pH值依赖性。综上所述,本研究确定了FcRn与IgG抗体Fc段CH2结构域存在细胞共定位与互作关系,二者的结合具有pH依赖性,这为构建新的基于Fc的小型抗体融合蛋白提供了材料。

来源：2021年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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