农业生物技术学报

作者：张艺榕, 李长红, 陈炯

单位：宁波大学 海洋学院 生物化学与分子生物学实验室,宁波 315832

关键词：花鲈,分化簇抗原302 (CD302),哈维氏弧菌,基因表达,Western blot,

基金：国家自然科学基金(31402333); 宁波市科技创新团队计划项目(2015C110018); 宁波市自然科学基金(2019A610420); 宁波大学研究生科研创新基金(IF2020144)

分化簇抗原302 (cluster of differentiation 302, CD302),又称DEC-205相关的C型凝集素-1 (DEC-205-associated C-type lectin-1, DCL-1),是一种Ⅰ型跨膜C型凝集素受体(C-type lectin receptor, CLR),参与细胞粘附、迁移、胞吞和吞噬等过程,在抵抗病原感染的过程中发挥着重要作用。本研究从花鲈 (Lateolabrax japonicus)组织转录组中获得LjCD302 cDNA序列(GenBank No. MT468568)。LjCD302 cDNA全长2 280个核苷酸,开放阅读框包含729个核苷酸,编码由242个氨基酸(anomic acid, aa)组成、分子量为26.9 kD以及等电点为4.97的多肽。LjCD302分子内包含1个信号肽序列(aa 1~27)、1个C型凝集素样结构域(C-type lectin-like domain, CTLD) (aa 30~165)、1个跨膜结构域(aa 179~201)和1个胞质尾区(aa 202~242)。氨基酸序列同源性分析显示,LjCD302与尖吻鲈(Lates calcarifer) CD302同源性最高,为82.0%。系统进化树分析表明,鱼类、两栖类、爬行类及哺乳动物CD302单独成簇,LjCD302位于鱼类这一大簇中,与尖吻鲈进化关系最近。实时荧光定量PCR分析表明,LjCD302 mRNA主要在健康花鲈肝中表达,其次是头肾;哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后,LjCD302 mRNA在头肾、鳃、肠、脾和肝组织中的表达均显著上调(P<0.05)。原核表达了LjCD302的CTLD结构域,并制备了抗血清。Western blot分析表明,LjCD302在哈维氏弧菌感染花鲈的头肾中表达量显著增加(P<0.05)。综上,LjCD302 mRNA与蛋白的表达与哈维氏弧菌感染呈正相关,提示其可能在鱼类抗菌免疫应答中发挥重要作用。研究结果为进一步研究鱼类CLR的功能及其在抗菌免疫中的作用机制提供基础。

来源：2021年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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