农业生物技术学报

作者：卢春霞, 刘长彬, 周平, 林祥群

单位：1 长江师范学院 现代农业与生物工程学院,重庆 408100; 2 新疆农垦科学院 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,石河子 832000; 3 新疆石河子职业技术学院,石河子 832000

关键词：妊娠相关糖蛋白(PAGs),适配体,早期妊娠诊断,酶联适配体分析(ELAA),奶牛,

基金：重庆市自然基金面上项目(cstc2020jcyj-msxmX0080);国家自然科学基金(31860647)

免疫分析测定妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoproteins, PAGs)是目前常用的家畜早期妊娠检测方法,但是抗体作为识别分子存在制备周期长、成本高等缺点。为丰富奶牛(Bos taurus)早期妊娠诊断技术,降低检测成本,本研究以牛(bovine)妊娠相关糖蛋白(bPAG)的核酸适配体为识别分子,基于双适配体夹心原理,建立了一种bPAG的可视化检测方法,并对适配体浓度、适配体-辣根过氧化物酶浓度、封闭剂浓度、反应时间、包被缓冲液等条件进行了优化。结果显示,在优化条件下,bPAG9在0.5~100 ng/mL浓度范围内呈良好线性(R=0.998),检测限为0.22 ng/mL,目测可视化检测限0.5 ng/mL。采用3个梯度浓度(1, 10, 100 ng/mL)的bPAG9做空白样品添加实验,平均加标回收率为93.2%~105.8%,相对标准偏差为 3.51%~7.13%。将建立的方法应用于人工授精30 d后的奶牛血清检测,并采用超声波检测法进行对比验证,本方法妊娠诊断准确率达到91.7%。本研究为奶牛早期妊娠诊断提供一种简便、经济、可靠的快速检测新技术。

来源：2021年第7期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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