农业生物技术学报

作者：牛香香, 李雪洋, 许倩茹, 李青梅, 王雅楠, 张申立, 马强, 张二芹, 张改平

单位：1河南农业大学 动物医学院,郑州 450046; 2国家动物免疫学国际联合研究中心, 郑州 450046; 3西北农林科技大学 动物医学院,杨凌 712100; 4 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,郑州 450002; 5吉林大学 动物医学院,长春 130062; 6河南省农业科学院 畜牧兽医研究所,郑州 450002

关键词：转基因水稻,HA蛋白,离子交换层析,疏水层析,亲和层析,

基金：转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08001006-10)

血凝素(hemagglutinin, HA)蛋白是禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)表面的一种糖蛋白,能诱导机体产生中和抗体,也是AIV主要的保护性抗原。已在水稻(Oryza sativa)胚乳中成功表达禽流感病毒H9N2 HA蛋白。为了建立水稻源禽流感病毒H9N2亚型HA蛋白的纯化方法,本研究分别采用两种方法进行HA蛋白的纯化。方法一：将HA蛋白水稻粉末按照质量与体积1∶5比例加入到提取液中,室温下搅拌,离心、取上清液,过滤后,首先经Q阴离子层析捕获到HA粗提蛋白,其次利用HA蛋白抗体亲和层析精细纯化HA蛋白,收集洗脱液,检测目的蛋白;方法二：用与方法一同样的方法获得HA粗提蛋白,根据Butyl疏水填料特性,HA粗提蛋白液中加入硫酸铵,搅拌、离心和过滤,进行第2步纯化,将收集到的洗脱液浓缩、换液,再经过SP阳离子层析纯化,收集洗脱液,获得HA蛋白。将两种方法纯化的HA蛋白经过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的纯度,并将HA蛋白送公司测序。结果表明,方法一：Q阴离子层析与HA免疫抗体亲和层析两种组合纯化HA蛋白的纯度约为90％左右。该组合纯化蛋白的方法相对简单,但需要培养和纯化单克隆抗体,此方法适合实验室快速小规模的蛋白纯化;方法二：Q阴离子层析、Butyl疏水层析和SP阳离子层析3种组合纯化的HA蛋白纯度达到90％左右。该方法适合建立HA蛋白的纯化工艺,用于大规模纯化HA蛋白。这两种方法获得的HA蛋白经测序与已知的氨基酸序列一致。本研究首次建立2种从水稻中获得高纯度重组H9N2亚型HA蛋白的方法,为今后制备禽流感H9N2亚型亚单位疫苗提供基础资料。

来源：2021年第7期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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