农业生物技术学报

作者：陈鑫鑫, 王林建, 乔松林, 李睿, 邓瑞广, 张改平

单位：1河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,郑州 450002; 2河南农业大学,郑州 450002

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),HN07-1,感染性克隆,反向遗传技术,病毒拯救,

基金：河南省农业科学院杰出青年科技基金(2020JQ06); 河南省生猪产业体系创新团队项目(S2012-06); 财政部和农业农村部：国家现代农业产业技术体系

猪繁殖与呼吸综合征是世界规模化猪场的主要疫病之一,主要由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起。本研究旨在构建PRRSV高致病性毒株HN07-1反向操作系统。通过将基因组进行分段克隆和测序的方法获得HN07-1毒株全长基因组序列。运用反向遗传学技术将全基因组分段克隆至载体上,构建含有全长HN07-1毒株cDNA的感染性克隆pcDNA3.2-rHN07-1,并以此为骨架,构建在PRRSV基因组ORF1b和ORF2a间插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)的重组克隆pcDNA3.2-rHN07-1-EGFP;将构建的质粒转染Marc-145细胞拯救病毒。采用免疫荧光实验(immune fluorescence assay, IFA)和Western blot进行表达鉴定并对重组病毒进行滴度测定与分析。结果表明,PRRSV毒株HN07-1基因组全长15 345 nt,转染Marc-145细胞盲传一代后培养48 h出现典型的细胞病变效应,IFA和Western blot检测结果表明,拯救病毒与亲本毒株HN07-1一致,都能检测到PRRSV N蛋白表达。并且拯救病毒与亲本毒株具有相似的生长动力特性。综上所述,本研究成功构建了HN07-1感染性克隆,可用于反向遗传操作,为PRRSV致病机制研究及疫苗研发提供了参考。

来源：2021年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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