农业生物技术学报

作者：马睿, 王萌, 李秦, 何翃闳, 王靖雷, 崔燕, 余四九, 潘阳阳

单位：1 甘肃农业大学 生命科学技术学院,兰州 730070; 2 甘肃农业大学 动物医学院/甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心,兰州 730070

关键词：表皮生长因子,自噬,胞吞,卵丘细胞,

基金：国家自然科学基金(31472244; 31660732; 31702311)；国家重点研发项目(2017YFD0502200)；甘肃省青年科技基金计划(17JR5RA141)；甘肃省重点研发项目(17YF1NA058)；甘肃农业大学伏羲青年英才基金(Gaufx-02Y10)

自噬和胞吞是细胞内重要的生理活动,可调控细胞的生长状态以应对恶劣环境的威胁。为探究表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)对小鼠(Mus musculus)卵丘细胞自噬和胞吞活动的影响,本研究使用浓度为0、50、100、150、200 ng/mL的EGF及适宜浓度(40 μg/mL)表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)抑制剂Gefitinib作用于小鼠卵丘细胞,提取细胞总RNA和总蛋白。利用qRT-PCR及Western-blot技术测定各浓度下自噬相关基因5 (autophagy related gene 5, Atg5)、Bcl-2同源结构域蛋白(Bcl-2 homologous domain protein, Beclin1)、微管相关蛋白轻链3 (microtubule-associated protein light chain 3, LC3)、小窝蛋白(caveolin, Cav) Cav1和Cav2的相对表达量,并结合免疫荧光技术对5种蛋白在细胞的表达定位进行比较分析。结果显示：Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2五种蛋白均主要在卵丘细胞质表达。经EGF处理,基因表达水平上,Atg5、LC3及Cav1相对表达量显著上升,且在150 ng/mL处最高(P<0.05),而Beclin1、Cav2相对表达量显著下降,在150和200 ng/mL处最低(P<0.05);蛋白表达水平上,Atg5、Beclin1、LC3表达量均显著升高(P<0.05),且在150~200 ng/mL处最高(P<0.05),此外LC3Ⅰ和LC3Ⅱ在200 ng/mL处最高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ在100 ng/mL处最高,Cav1、Cav2蛋白在50 ng/mL处表达量均显著升高(P<0.05),而在200 ng/mL处均显著降低(P<0.05)。抑制EGFR后,基因表达水平上,Atg5、LC3和 Cav1相对表达量显著升高,而Beclin1、Cav2表达量显著降低(P<0.05),蛋白表达水平上,Atg5、Beclin1、LC3、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Cav1表达量均显著增高(P<0.05或P<0.01),Cav2蛋白表达量显著降低(P<0.01)。研究结果表明EGF可能参与调节Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2的表达,对小鼠卵丘细胞的自噬和胞吞活动起重要调控作用。本研究为进一步研究EGF对小鼠卵丘细胞自噬和胞吞的调控机制提供参考依据。

来源：2020年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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