农业生物技术学报

作者：张宏祥, 李坤明, 王娜, 翟介明, 陈松林

单位：1 中国水产科学研究院 黄海水产研究所/青岛海洋科学与技术国家实验室/海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室,青岛 266071;2 上海海洋大学 水产与生命学院,上海 201306;3 山东莱州明波水产有限公司,烟台 261400

关键词：斑石鲷,肝脏细胞系,原代培养,核型,

基金：中国水产科学研究院黄海水产研究所基本科研业务费(20603022019008); 山东省泰山学者攀登计划专项

鱼类细胞培养技术是一种被广泛应用于病毒学、环境毒理学、细胞生物学、基因组学以及遗传学等方面研究的重要研究手段。斑石鲷(Oplegnathus punctatus)是优良的海水养殖鱼类,在水产养殖产业中备受青睐。本研究通过组织块法,以斑石鲷肝脏组织为材料,建立了斑石鲷肝脏细胞系(O. punctatus liver cell line, OPL)。培养细胞系所用的培养基是在L-15基本培养基中添加了青链霉素混合液、胎牛血清 (fetal bovine serum, FBS)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)和β-巯基乙醇(2- mercaptoethanol, 2-ME)所配成的完全培养基。培养出的OPL细胞主要由成纤维样细胞构成,生长分裂旺盛,成功传至30多代。比较不同培养基：L-15 (Leibovitz-15)、DMEM/F12 (Dulbecco's modified Eagle medium/Ham's F-12)、DMEM和MEM对OPL细胞生长的影响,结果表明,L-15培养基最适用OPL的培养。此外,检测了温度、FBS浓度、bFGF浓度对OPL细胞生长的影响。结果表明,OPL细胞在18~30 ℃能正常生长,24 ℃是最适生长温度;OPL细胞在0%~20% FBS浓度范围内,其生长速度随血清浓度的升高而增快;在培养基中添加bFGF可以提高细胞生长速度。核型分析显示,第20代OPL细胞显示为正常二倍体核型(2n=2sm+46t),但其比例仅为68%。通过脂质体转染法将pEGFP-N3质粒转入OPL细胞中,可表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)。用斑石鲷的线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ(cytochrome oxidase subunitⅠ, COⅠ)基因进行检测,确定该OPL细胞系来源于斑石鲷。OPL细胞系的建立将为斑石鲷致病性病毒的感染机制、细胞及基因的功能分析等研究提供实验材料。

来源：2020年第2期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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