农业生物技术学报

作者：秦鑫, 王亚东, 李红梅, 于家荣, 王暄

单位：南京农业大学 植物保护学院/农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室,南京 210095

关键词：多重PCR,线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ,基因(mtCOI),短体线虫,特异性,

基金：公益性行业(农业)科研专项(201503114); 国家自然科学基金(31471751; 31872923)

短体线虫(Pratylenchus spp.)是严重破坏世界农业生产的一类植物寄生线虫,建立针对该类线虫的快速检测方法,对根腐线虫病的综合防控至关重要。本研究基于线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(mitochondrial cytochrome oxidaseⅠ, mtCOI)基因序列,分别设计了咖啡短体线虫(P. coffeae)、落选短体线虫(P. neglectus)和斯克里布纳短体线虫(P. scribneri)的特异性上游引物Pc-m193-F、Pn-m280-F和Ps-m66-F以及三者通用的下游引物Pcns-m-R,扩增产物预期大小分别为225、137和351 bp,检测灵敏度分别为1/1 000、1/10 000和1/100单条成虫;经过不同引物配比及退火温度等反应条件优化,当引物Pc-m193-F、Pn-m280-F、Ps-m66-F、Pcns-m-R浓度分别为0.4、0.4、0.8、1.2 µmol/L,退火温度为54 ℃时,上述引物组合在1个PCR反应体系中能够同时检测出3种靶标线虫。运用该多重PCR体系对18个短体线虫样品进行检测,结果与已知鉴定结果相一致。本研究建立的多重PCR体系可快速检测咖啡短体线虫、落选短体线虫和斯克里布纳短体线虫单一或复合侵染样品,可为我国小麦(Triticum aestivum)根腐线虫病的诊断与综合治理提供技术支持。

来源：2020年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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