农业生物技术学报

作者：胡平各, 邹芝英, 祝璟琳, 喻杰, 肖炜, 李大宇, 杨弘, 马银花, 陈炳霖

单位：1 南京农业大学 无锡渔业学院,无锡 214081;2 中国水产科学研究院 淡水渔业研究中心/农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室,无锡 214081

关键词：尼罗罗非鱼,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),多克隆抗体,蛋白表达,

基金：现代农业产业技术体系建设专项(特色淡水鱼产业体系)(CARS-46); 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项基金(2019JBFZ06; 2020TD37); 农业部水产原良种保种选育专项(罗非鱼)(2130315)

p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38MAPK)在生物自身免疫调节过程中起着重要的作用。为探讨p38MAPK在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫应答中的作用机制,本研究全基因合成p38MAPK部分编码序列,构建了重组质粒pET-28a-p38MAPK,并成功在大肠杆菌(Escherichia coli)中诱导表达;诱导表达的蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后,免疫新西兰白兔(Oryctolagus cuniculus)制备了尼罗罗非鱼p38MAPK多克隆抗体,并用多克隆抗体检测尼罗罗非鱼不同组织中p38MAPK蛋白表达情况。研究结果显示,诱导表达的重组蛋白约为23 kD,主要以包涵体的形式存在,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和Western blot分析表明,所制备抗体效价达到1∶256 000,且能特异性识别p38MAPK蛋白。组织表达分析表明,p38MAPK在尼罗罗非鱼各组织中广泛分布,在卵巢,脑和肌肉中表达最强,头肾和血液次之,皮肤和鳃表达较弱,肝、脾、肠和心脏表达最弱。本研究为深入了解尼罗罗非鱼抗病免疫提供了基础资料。

来源：2020年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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