农业生物技术学报

作者：谭炎宁, 余东, 盛夏冰, 康伟伟, 李哲理, 段美娟, 袁定阳

单位：1 湖南杂交水稻研究中心 杂交水稻国家重点实验室,长沙410125;2 湖南农业大学 生物科技学院,长沙410128;3 湖南农业大学 农学院,长沙410128

关键词：基因定位,质量性状基因,特异性位点扩增片段测序(SLAF-seq),分群分析法(BSA),水稻,

基金：湖南农业科技创新资金项目(2017XC09)；湖南省自然科学基金项目(2019JJ40206)；湖南杂交水稻研究中心科研创新基金(YB201907)

将传统分群分析法(bulk segregant analysis, BSA)与全基因组特异性位点扩增片段测序手段(specific-locus amplified fragment sequencing, SLAF-seq)深度整合的SLAF-seq BSA技术为快速定位质量性状基因提供了可能。然而,对这一技术的定位准确性程度却少有报道。本研究以水稻(Oryza sativa)黄化转绿基因grc2 (green-revertible chlorina, grc2)为对象,分析了SLAF-seq BSA定位结果与传统图位定位结果的差异。首先,通过简化基因组测序获得了在'grc2'突变体和正常叶色水稻'Y58S'之间表现出单核苷酸多态性的5 302个SLAF标记;然后,利用Y58S/grc2的F2群体中的100个野生型单株和100个突变型单株构建了两个极端混池,再通过自动化计算各SLAF标记在极端混池中的父母本基因型频率,筛选到了符合在0.01水平满足父本('grc2')、母本('Y58S')基因型在野生型混池中为33∶66且在突变型混池中为99∶1的关联标记共13个,这些标记集中分布在Chr06前臂的0.98~1.21 Mb与1.57~1.99 Mb两个相邻区域。经连锁分析发现,第1区域的关联标记AM1、AM6与grc2基因的遗传距离仅为0.625和0 cM;将关联标记比对至日本晴参考基因组后,发现第1关联区域恰好覆盖了grc2基因的传统定位区间,表明SLAF-seq BSA的定位结果具有参考价值。本研究结果为支撑SLAF-seq BSA能快速关联质量性状基因提供了证据。

来源：2020年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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